非洲菊再生體系的建立和遺傳轉(zhuǎn)化體系的探索.pdf

1、非洲菊為世界著名切花,花大、色艷、切花率高、水養(yǎng)期長(zhǎng),兼具色、形、韻之美,觀賞價(jià)值極高,值得廣泛種植.現(xiàn)在國(guó)內(nèi)的非洲菊優(yōu)良品種主要是通過從國(guó)外高價(jià)購(gòu)進(jìn)種子或種苗來獲得,因此有必要利用各種育種方法培育中國(guó)自己的優(yōu)良品種.該項(xiàng)目研究的目的就是針對(duì)非洲菊的育種方面的問題,研究非洲菊的高頻再生體系及利用研究GUS基因的轉(zhuǎn)化來探討建立非洲菊的遺傳轉(zhuǎn)化體系,從而為優(yōu)良品種的培育、改良和快速推廣提供物質(zhì)與技術(shù)支持.該實(shí)驗(yàn)主要利用優(yōu)良的非洲菊品種的葉片

2、作為材料,建立了非洲菊的高頻再生體系,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的GUS基因的轉(zhuǎn)化,利用共培養(yǎng)后組織化學(xué)染色法分析探討了影響轉(zhuǎn)化效率的各種因素,初步優(yōu)化遺傳轉(zhuǎn)化體系.主要結(jié)果如下:1.建立了非洲菊的再生體系.該實(shí)驗(yàn)得出愈傷組織的誘導(dǎo)是以MS為基本培養(yǎng)基,附加7mg/L2,4-D+0.1mg/L NAA,或者6mg/L BA+0.1mg/L NAA的效果為最佳,然后及時(shí)轉(zhuǎn)接到MS+2mg/L BA+0.1mg/L NAA的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)芽

3、的分化.增殖培養(yǎng)是以MS+2mg/L 1BA+0.1mg/L NAA和MS+3mg/LKT+0.1mg/L IBA交互使用為佳.生根培養(yǎng)是以1/2MS+0.1~0.2mg/L NAA的培養(yǎng)基為最佳.2.初步建立遺傳轉(zhuǎn)化體系.以GUS組織染色分析為依據(jù)初步建立了轉(zhuǎn)化體系:用非洲菊的葉片和愈傷作侵染材料,預(yù)培養(yǎng)5d,在OD值為0.8的農(nóng)桿菌液中侵染10min,共培養(yǎng)3d,此時(shí)GUS基因的瞬間表達(dá)率為最高,然后葉片轉(zhuǎn)接到含400mg/L Ca