36114.重組人干擾素的基因表達(dá)以及peg修飾_第1頁
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文檔簡介

1、碩士學(xué)位論文重組人干擾素的基因表達(dá)以及PEG修飾ExpressionandPEGylationofRecombinantHumanInterferon學(xué)科專業(yè)：藥物化學(xué)研究生：袁永指導(dǎo)教師：王勁峰教授天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院二零零八年五月ABSTRACTRecombinantinterferon口isusedclinicallytOtreatavarietyofdiseasesandcancersbecauseofitsantivir

2、al，antiproliferativeandimmunoregulatorypropertiesHowever，thedisadvantageofshortcirculatinghalflifeofIFN一口invivomakesitnotwelcomedbymostpatientsTherefore，thechemicalconjugationofpolyethyleneglycol(PEG)andtheproteininthiss

3、tudyisusedtOovercomethisproblemThefreeeysteineresiduewhichisintroducedbyusingsite—directedmutagenesisSelVeSastheattachmentpointforcovalentmodificationoftheproteinwithacysteine—reactivePEGmolecule，resultinginahomogeneousp

4、roductwithahighbiologicalactivityweexpectTheplasmidcontainingIFN口genewasconstructedbyBolderBiotechnology。anditwasidentifiedbyenzymedigestionandDNAsequencingTheplasmidwastransformatedtoEcoliW3110，anddataofSDS—PAGEandWeste

5、rn—blotindicatedthata19KDproteinwasexpressedintheformofinclusionbodieswithgoodimmunityMeanwhile，theexpressionconditionswerealsooptimizatedandtheresultwasthattemperaturewas37“(2，pHofmediawas70，concentrationofIPTGwas05mM，i

6、nductiontimewasl6hAfterdenaturationandrenaturationofinclusionbodiesthetargetproteininterferon口wasobtainedutilizingionexchangechromatography(IEC)andthepuritywasabove98％Wecangetabout22mgproteinfrom1LmediaFinallyIFN口reactsw

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