豬帶絳蟲重組Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗保護(hù)力及其免疫機(jī)制研究.pdf

1、目的：在成功構(gòu)建豬帶絳蟲重組Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗的基礎(chǔ)上，將豬帶絳蟲重組Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗口服灌胃免疫仔豬，觀察其誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的動(dòng)態(tài)變化和對豬帶絳蟲卵攻擊的保護(hù)力及其免疫機(jī)制，為豬囊尾蚴病的防治提供一種有價(jià)值的疫苗。
　　方法:為了觀察其誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的動(dòng)態(tài)變化，將40日齡健康仔豬隨機(jī)分為4組，每組4頭。第1組為1011CFU豬帶絳蟲重組Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗灌胃組；

2、第2組為1011CFU豬帶絳蟲重組Bb-TSO45W-4B疫苗灌胃組；第3組為1011CFU豬帶絳蟲重組Bb-TSOL18疫苗灌胃組；第4組為雙歧桿菌液體培養(yǎng)基（MRS）對照組。間隔兩周免疫1次，共免疫次。采用ELISA法檢測各組仔豬免疫后0、2、4、6、8周血清抗體IgG、IgG1、IgG2a水平和外周血淋巴細(xì)胞（PBMC）培養(yǎng)上清液IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10水平；采用MTT比色法檢測 PBMC增殖水平；采用流式細(xì)胞術(shù)

3、（FCM）檢測PBMC中CD4+和CD8+T細(xì)胞亞群。
　　為了研究豬帶絳蟲卵攻擊后誘導(dǎo)的保護(hù)力及其免疫機(jī)制，將40日齡健康仔豬隨機(jī)分為5組，每組4頭。第1組為1011CFU豬帶絳蟲重組Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗灌胃組；第2組為1011CFU豬帶絳蟲重組Bb-TSO45W-4B疫苗灌胃組；第3組為1011CFU豬帶絳蟲重組Bb-TSOL18疫苗灌胃組；第4組為空載體對照組；第5組為MRS對照組。間隔兩周免疫1次，共

4、免疫2次。于疫苗末次免疫后4周，用豬帶絳蟲活蟲卵給每頭仔豬灌胃進(jìn)行攻擊感染，攻擊感染3月后，解剖豬體，摘取囊尾蚴，計(jì)算減蚴率；采用ELISA法檢測各組仔豬血清抗體IgG、IgG1、IgG2a水平和PBMC培養(yǎng)上清液IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-10水平；采用MTT比色法檢測PBMC增殖水平。
　　結(jié)果：動(dòng)態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)豬帶絳蟲重組Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔豬后，血清抗體IgG、IgG1、IgG2a水平分別

5、在免疫后2～8周、2～8周、2～8周升高，分別在免疫后4周、6周、4周達(dá)較高水平；PBMC增殖水平在免疫后2～8周升高，在免疫后6周達(dá)較高水平；PBMC中CD4+和CD8+細(xì)胞亞群分別在免疫后2～8周和2～8周升高，分別在免疫后8周和6周達(dá)較高水平；PBMC培養(yǎng)上清液中 IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10水平分別在免疫后2～6周、2～8周、4～6周和2～8周升高，分別在免疫后4周、6周、4周和8周達(dá)較高水平。其免疫應(yīng)答水平，豬帶

6、絳蟲重組Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗組優(yōu)于重組Bb-TSO45W-4B疫苗組和重組Bb-TSOL18疫苗組。
　　進(jìn)一步用豬帶絳蟲重組Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔豬，豬帶絳蟲卵攻擊后發(fā)現(xiàn)，免疫仔豬獲得83.09％的保護(hù)力；血清IgG和IgG2a水平升高，IgG1水平降低；PBMC增殖水平升高；PBMC培養(yǎng)上清液中IL-2和IFN-γ水平升高，IL-4和IL-10水平降低。其免疫保護(hù)效果，豬帶絳蟲重

7、組 Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗組優(yōu)于重組Bb-TSO45W-4B疫苗組和重組Bb-TSOL18疫苗組。
　　結(jié)論：動(dòng)態(tài)觀察表明，豬帶絳蟲重組Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔豬后，可誘導(dǎo)仔豬產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。攻擊試驗(yàn)表明，豬帶絳蟲重組 Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗能夠誘導(dǎo)仔豬產(chǎn)生一定的保護(hù)力，Th1型免疫應(yīng)答在其誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫機(jī)制中起重要作用。其免疫保護(hù)性，豬帶絳蟲重組 Bb-TSO