Somatostatin在非洲雛鴕胃腸道的胸腺內(nèi)的分布研究.pdf

1、鴕鳥從非洲引進(jìn)到我國飼養(yǎng)，其生存的氣候和環(huán)境等均發(fā)生了較大的變化，導(dǎo)致出現(xiàn)諸如免疫力下降、生產(chǎn)性能降低等現(xiàn)象。此外，鴕鳥育雛期長達(dá)3個月，在育雛期內(nèi)，雛鴕鳥的生長發(fā)育較為緩慢，而且易發(fā)生胃腸道疾病。為了提高鴕鳥育雛期的免疫力，降低胃腸道疾病的發(fā)生，需要對鴕鳥胃腸道和免疫器官的形態(tài)發(fā)育與功能調(diào)控開展詳細(xì)的基礎(chǔ)研究。Somatostatin(SS)中文譯名生長抑素，是Brazeau等人1973年從綿羊下丘腦提取物鑒定的一種神經(jīng)肽。SS廣泛產(chǎn)

2、生于中樞神經(jīng)和許多外周器官包括胃腸、胰腺、胸腺等器官。SS的功能復(fù)雜多樣，參與神經(jīng)功能、激素分泌、免疫反應(yīng)、胸腺發(fā)育、胃腸分泌和運(yùn)動的調(diào)節(jié)。目前，對SS在鴕鳥胃腸道和胸腺內(nèi)的分布和增齡性變化未見研究報道。本研究以此為切入點(diǎn)，采用石蠟切片、免疫組織化學(xué)方法和分子生物學(xué)技術(shù)等綜合技術(shù)手段，對SS在非洲雛鴕鳥胃腸道和胸腺內(nèi)的分布定位和增齡性變化規(guī)律進(jìn)行系統(tǒng)的研究，旨在為闡明SS對雛鴕鳥胃腸道和胸腺的功能調(diào)控，提供形態(tài)學(xué)依據(jù)，從而為鴕鳥的飼養(yǎng)管

3、理和疾病防治提供理論指導(dǎo)，并為豐富SS在不同種類動物的分布資料、深刻理解SS神經(jīng)肽功能的多樣性和生物進(jìn)化性提供科學(xué)依據(jù)。主要工作與研究結(jié)果如下:
　　1.非洲雛鴕鳥胃腸道內(nèi)SS的分布表達(dá)
　　采用免疫組化SABC法和RT-PCR法分別對90d非洲雛鴕鳥胃腸內(nèi)SS免疫陽性細(xì)胞的分布、形態(tài)學(xué)特點(diǎn)和SSmRNA的表達(dá)進(jìn)行觀察和檢測。免疫組化研究結(jié)果顯示:雛鴕鳥腺胃、小腸內(nèi)均見有SS陽性細(xì)胞的分布，而在肌胃、大腸內(nèi)未觀察到有SS陽性

4、細(xì)胞的分布。在腺胃黏膜下層內(nèi)的腺小葉內(nèi)，可見有大量的SS陽性細(xì)胞分布。在小腸各段的黏膜層內(nèi)可見有SS陽性細(xì)胞分布。在十二指腸內(nèi)可觀察到大量的陽性細(xì)胞分布，而在空腸和回腸內(nèi)，僅有少量的陽性細(xì)胞稀疏分布。RT-PCR法研究結(jié)果顯示:雛鴕鳥的腺胃、小腸和結(jié)腸內(nèi)有SSmRNA表達(dá)，而肌胃、盲腸和直腸內(nèi)未見SSmRNA表達(dá)。鴕鳥胃腸道內(nèi)SS的分布與對其它動物的報道相似，但也存在差異，反映了SS在不同動物胃腸道的分布存在保守性和多樣性。
　　

5、2.SS免疫陽性細(xì)胞在非洲雛鴕鳥腺胃和小腸內(nèi)發(fā)育性變化
　　采用免疫組化SABC法和圖像分析技術(shù)對1d、45d、90d非洲雛鴕鳥腺胃和小腸內(nèi)SS免疫陽性細(xì)胞的分布進(jìn)行半定量分析，并與1y鴕鳥比較。結(jié)果顯示:與1d相比，雛鴕鳥腺胃內(nèi)SS陽性細(xì)胞分布密度值45d時顯著升高(P＜0.05)，于45d達(dá)到峰值，90d和1y時又開始逐漸降低;雛鴕鳥十二指腸內(nèi)陽性SS細(xì)胞分布密度值1d時最低，45d和90d時顯著升高(P＜0.05)，于90d

6、達(dá)到峰值，1y時又開始降低;而雛鴕鳥空腸和回腸內(nèi)SS細(xì)胞分布密度1d時最高，45d和90d時顯著降低(P＜0.05)。SS陽性細(xì)胞分布密度在育雛期階段鴕鳥腺胃和小腸內(nèi)呈現(xiàn)規(guī)律性變化，提示SS可能在育雛期鴕鳥胃腸道發(fā)育和功能方面，起到重要的調(diào)控作用。
　　3.非洲雛鴕鳥胸腺內(nèi)SS的分布表達(dá)
　　采用免疫組織化學(xué)SABC和RT-PCR法分別對90d的雛鴕鳥胸腺內(nèi)SS免疫陽性細(xì)胞的分布、形態(tài)學(xué)特點(diǎn)和SSmRNA的表達(dá)進(jìn)行觀察和檢測

7、。免疫組化試驗(yàn)結(jié)果顯示:在鴕鳥的胸腺內(nèi)有少量的SS免疫陽性細(xì)胞存在。陽性細(xì)胞稀疏地分布在胸腺皮質(zhì)和髓質(zhì)區(qū)，大多分布在皮質(zhì)髓質(zhì)交界處，細(xì)胞大多呈圓形或橢圓形，有些細(xì)胞呈梭形或梨形細(xì)胞，并且伸出細(xì)長的突起。RT-PCR檢測結(jié)果顯示:雛鴕鳥的胸腺內(nèi)有SSmRNA表達(dá)。這些結(jié)果表明SS可能通過自分泌和旁分泌的方式，參與調(diào)節(jié)鴕鳥胸腺細(xì)胞的發(fā)育。
　　4.SS在非洲雛鴕鳥胸腺內(nèi)的發(fā)育性交化
　　采用免疫組織化學(xué)SABC法和圖像分析技術(shù)對

8、1d、45d、90d的非洲雛鴕鳥胸腺內(nèi)SS免疫陽性細(xì)胞的分布進(jìn)行觀察分析，并與1y鴕鳥比較。結(jié)果顯示:雛鴕鳥胸腺內(nèi)SS陽性細(xì)胞分布密度值1d時較低，45d時顯著增加(P＜0.05)。45d之后，鴕鳥胸腺內(nèi)SS陽性細(xì)胞分布密度值雖有增加，但無顯著性差異。這些變化表明，SS可能在育雛期前期對鴕鳥胸腺細(xì)胞的發(fā)育起到重要的調(diào)控功能。
　　5.非洲鴕鳥SScDNA克隆和分析
　　根據(jù)GenBank中報道的雞SSmRNA序列設(shè)計引物，以

9、非洲鴕鳥腺胃總RNA為材料，采用RT-PCR法，擴(kuò)增出非洲鴕鳥SScDNA產(chǎn)物，將其克隆、鑒定及序列測定與分析。結(jié)果顯示:從非洲鴕鳥腺胃中擴(kuò)增出了SS基因，序列大小為348bp;用DNAMAN軟件將非洲鴕鳥SS基因序列與從GeneBank上查到的其它動物的基因序列進(jìn)行同源性分析，同源性在95.1％～72.2％之間。使用DNASTAR軟件對非洲鴕鳥SScDNA序列分析顯示該核苷酸序列編碼116個氨基酸殘基的前體肽，將SS前體肽的氨基酸序列