水稻條紋病毒CP、NS3、SP、NSvc4基因介導(dǎo)的病毒抗性比較研究.pdf

1、水稻條紋病毒(Rice stripe virus，RSV)引發(fā)的水稻條紋葉枯病是一種水稻生產(chǎn)上作用范圍廣，危害嚴(yán)重的病毒病。RNA 介導(dǎo)的病毒抗性是一種轉(zhuǎn)錄后基因沉默(PostTranscriptional Gene Silencing，PTGS)。最新的研究證明發(fā)生于不同物種上的RNA 沉默的直接引發(fā)因子都是雙鏈RNA(double strand RNA)。在轉(zhuǎn)基因植物研究中，dsRNA 形成的一條有效途徑就是將體外構(gòu)建的hpRNA

2、結(jié)構(gòu)（hairpin RNA）cDNA 引入植物。本研究構(gòu)建了4個(gè)含有RSV 不同功能基因發(fā)夾RNA（hpRNA）結(jié)構(gòu)的植物表達(dá)載體（轉(zhuǎn)錄后形成雙鏈RNA），利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻，對獲得轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行水稻條紋病毒抗性鑒定，比較RSV 外殼蛋白基因CP、特異性蛋白基因SP、非特異性蛋白基因NS3及運(yùn)動(dòng)相關(guān)蛋白基因NSvc4 在RNA 介導(dǎo)的病毒抗性方面的差異。具體結(jié)果如下：
　　 1、以RSV的CP、NS3、SP和NSvc4基

3、因3′端的400bp為目的片段，分別反向重復(fù)插入到含有經(jīng)過改造的植物表達(dá)載體pCAMBIA-1300'中，構(gòu)建了發(fā)夾結(jié)構(gòu)植物表達(dá)載體pPHD-CP、pPHD-NS3、pPHD-SP和pPHD-NSvc4。
　　 2、將所構(gòu)建的植物表達(dá)載體pPHD-CP、pPHD-NS3、pPHD-SP和pPHD-NSvc4及空載體pCAMBIA1300'用凍融法導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105。菌液PCR及酶切鑒定證明質(zhì)粒均已成功正確導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。

4、>　　 3、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻品種豫粳6號(hào)。經(jīng)卡那霉素對再生植株進(jìn)行抗性篩選，后經(jīng)PCR檢測，分別獲得轉(zhuǎn)pPHD-CP的水稻68株，轉(zhuǎn)pPHD-NS3的水稻70株，轉(zhuǎn)pPHD-SP的水稻57株，轉(zhuǎn)pPHD-NSvc4的水稻58株和轉(zhuǎn)pCAMBIA-1300'的水稻75株。
　　 4、以灰飛虱為傳毒介體，對上述水稻受體進(jìn)行常規(guī)生物學(xué)接毒，并進(jìn)行了抗病性分析。統(tǒng)計(jì)測定結(jié)果顯示，在轉(zhuǎn)pPHD-CP、pPHD-NS3、pPHD-SP