豬瘟病毒套式RT-PCR檢測(cè)方法的建立和種豬場(chǎng)豬瘟免疫與凈化研究.pdf

1、豬瘟（classical swine fever；CSF）是由豬瘟病毒（classical swine fever；CSFV）引起的豬的一種高度接觸性傳染病，死亡率非常高。目前，繁殖母豬往往呈現(xiàn)豬瘟病毒持續(xù)性感染狀態(tài)，作為傳染源而長(zhǎng)期存在于豬群中，這是規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟持續(xù)發(fā)生的一個(gè)重要原因。如何準(zhǔn)確的檢測(cè)出豬瘟帶毒陽(yáng)性種豬并及時(shí)進(jìn)行淘汰，對(duì)于規(guī)模化豬場(chǎng)控制甚至消滅豬瘟具有非常重要的意義。在開(kāi)展種豬群凈化工作的同時(shí)，針對(duì)仔豬群，應(yīng)當(dāng)采取有效

2、的免疫方案，提高仔豬群的豬瘟抗體水平，以抵御豬瘟病毒對(duì)仔豬的感染。因此本研究圍繞著建立能靈敏準(zhǔn)確檢測(cè)豬瘟帶毒豬的診斷方法和提高仔豬群的免疫抗體水平開(kāi)展了以下工作：
　　 1．豬瘟病毒套式RT-PCR檢測(cè)方法的建立及其在種豬群豬瘟凈化中的運(yùn)用
　　 利用序列分析軟件（VectorNT18）對(duì)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中不同國(guó)家和地區(qū)發(fā)布的29株豬瘟野毒及6株疫苗毒株的E2基因序列及BVDV基因序列的相應(yīng)位置進(jìn)行了比較分析，設(shè)計(jì)了兩對(duì)引

3、物，外套引物擴(kuò)增E2基因中目的片段大小為806bp，內(nèi)套引物擴(kuò)增大小為512bp。經(jīng)各種反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了豬瘟病毒套式RT-PCR檢測(cè)方法。結(jié)果表明：該方法的靈敏度與real-time RT-PCR相當(dāng)，比普通RT-PCR提高了100倍；運(yùn)用該方法對(duì)中國(guó)獸藥監(jiān)察所提供的19株豬瘟病毒的核酸及6種豬源常見(jiàn)病原的核酸樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，19株豬瘟病毒的核酸樣品檢測(cè)均呈陽(yáng)性，其它樣品則為陰性。
　　 運(yùn)用本方法對(duì)種豬豬瘟疫苗免

4、疫后的扁桃體疫苗毒株帶毒規(guī)律的研究，結(jié)果表明：當(dāng)種豬免疫5頭份豬瘟兔化弱毒細(xì)胞疫苗（750RID）25d之前均存在種豬扁桃體攜帶疫苗毒，免疫30d后進(jìn)行扁桃體活體取樣檢測(cè)全部呈陰性。為臨床如何有效的避免疫苗免疫對(duì)野毒檢測(cè)的影響提供試驗(yàn)依據(jù)。運(yùn)用該方法在4個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)開(kāi)展豬瘟的凈化工作，共檢測(cè)了種豬扁桃體樣品1491份，陽(yáng)性數(shù)為66份，陽(yáng)性率為4.43％，并將陽(yáng)性豬只實(shí)行了淘汰。同時(shí)對(duì)部分陽(yáng)性樣本進(jìn)行了核酸序列分析，顯示擴(kuò)增的陽(yáng)性樣本均為

5、豬瘟野毒株而非疫苗毒株。并對(duì)其中某場(chǎng)2008年不同時(shí)間送檢的陽(yáng)性樣本的PCR產(chǎn)物進(jìn)行核酸序列分析。結(jié)果表明，不同時(shí)間檢測(cè)到的豬瘟陽(yáng)性樣本屬于同一豬瘟野毒株。以上研究表明，本研究建立的套式RT-PCR方法適用于規(guī)模化豬場(chǎng)種豬群豬瘟野毒陽(yáng)性豬只的剔除，為控制和凈化種豬群豬瘟提供技術(shù)支撐。
　　 2．規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟免疫狀況調(diào)查及仔豬的免疫防控
　　 為了調(diào)查規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟的免疫方案，比較及評(píng)價(jià)其免疫效果，本研究將湖北省7個(gè)規(guī)模

6、化種豬場(chǎng)作為研究對(duì)象，將豬群分為經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬、后備母豬、哺乳仔豬（0～30日齡）、保育仔豬（3～60日齡）和生長(zhǎng)豬（61日齡以上）6個(gè)群體，并按各豬群5％～8％的比例采血，共采集了1650份血樣，檢測(cè)豬瘟抗體。結(jié)果表明：各豬群豬瘟免疫合格率分別為99.55％、96.43％、99.22％、89.88％、81.68％及78.64％，不同免疫方案下，各場(chǎng)豬群表現(xiàn)出不同免疫效果。其中保育仔豬的豬瘟免疫是各豬群中最為薄弱的環(huán)節(jié)。因此開(kāi)展了某規(guī)