免疫自身抗體

1、自身抗體,自身抗體檢測(cè)的意義,診斷與鑒別診斷病情活動(dòng)性評(píng)估和監(jiān)測(cè)協(xié)助轉(zhuǎn)歸和預(yù)后的評(píng)判預(yù)警,診斷：綜合手段 臨床+實(shí)驗(yàn)室+影像+病理,抗體依賴,抗體部分依賴,SLESSMCTDRAAPSGPAGBM(Goodpasture)AIH,PM/DMSScPBC,抗體非依賴,系統(tǒng)性血管炎：BDTAPANGCARPC,,ANA斑點(diǎn)型/RNP,5-10%血清陰性,Jo-1陽性率70%,Scl70,AMA-M2,

2、自身抗體是指抗自身細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞表面和細(xì)胞外抗原的免疫球蛋白ANA抗體譜自身免疫性肝病抗體譜ANCA磷脂抗體譜RA抗體譜器官特異性免疫病相關(guān)抗體甲狀腺：TG-Ab、TPO-Ab炎性腸?。篈SCA皮膚：天皰瘡抗體/類天皰瘡抗體胃：抗胃壁細(xì)胞抗體、抗內(nèi)因子抗體I型DM：IAA、ICA、GAD,,抗核抗體,ANA概念：抗核酸和核蛋白抗體的總稱細(xì)胞核內(nèi)和細(xì)胞漿內(nèi)成分ANA產(chǎn)生機(jī)制： 分子模擬/自身抗原改變/細(xì)

3、胞凋亡檢測(cè)底物 鼠肝、鼠腎（大/小鼠組織不含SSA/RO抗原） 人喉癌上皮細(xì)胞(Hep-2),ANA的診斷價(jià)值和除外價(jià)值,ANA陽性—診斷CTD？,ANA陰性—除外CTD？,假陽性未加稀釋的正常人血清1/3呈陽性低滴度ANA可見于感染、腫瘤、正常人意義未明的核型◎作為CTD的篩選試驗(yàn)必須強(qiáng)調(diào)滴度、核型,假陰性重癥SLE，抗體與大量抗原結(jié)合沉積于組織主要成分為抗dsDNA，疾病緩解期大量蛋白尿時(shí)從尿/腸

4、道丟失 技術(shù)：甲醇、乙醇固定導(dǎo)致SSA抗原丟失某些核抗原成分在胞漿內(nèi)或胞漿比核質(zhì)更豐富(如SSA/RO，Jo-1，rRNP等),球蛋白亦丟失,彌漫性結(jié)締組織病,ANA 18項(xiàng)抗ENAa-Jo-1a-Scl70a-rRNP,IIF法原理,熒光顯微鏡下ANA的染色型別,均質(zhì)型（Homogeneous）H： 抗組蛋白、抗dsDNA、ANuA斑點(diǎn)型（Speckle）S：

5、 與抗ENA有關(guān)核膜型（Membranous）M 抗dsDNA、板層素抗體、gp210抗體核仁型（Nucleolar）N RNA聚合酶、PM-Scl---SSc著絲點(diǎn)型（Centromere）C： CENP，ACA—CREST胞漿型：AMA、抗Jo-1、抗rRNP,抗dsDNA,抗rRNP,AMA,RNA多聚酶/抗

6、Scl-70,板層素抗體Gp210抗體,抗Jo-1抗SSA,H,M,S,N,胞漿型,著絲點(diǎn)型,紡錘體型,核點(diǎn)型,ANA分類,抗DNA（dsDNA,ssDNA)抗組蛋白（Histone)抗非組蛋白（Extractable Nuclear Antigen,ENA）抗核仁（Nucleolus）,書寫習(xí)慣：ANA(+) 型別 滴度,抗DNA,抗ssDNA抗體：針對(duì)嘌呤和嘧啶堿基，在多種疾病中及正常人血清中存在，無特異性抗dsDNA抗

7、體：針對(duì)脫氧核糖核酸骨架，對(duì)SLE有較高的特異性抗dsDNA陽性者85% 5年內(nèi)發(fā)展為SLE抗dsDNA與疾病活動(dòng)度相關(guān)抗dsDNA與LN相關(guān)：循環(huán)免疫復(fù)合物在腎小球基底膜沉積,或腎小球原位免疫復(fù)合物形成,檢測(cè)方法及結(jié)果意義,放射免疫法(Farr):敏感≥ 20%間接免疫熒光法(短膜蟲或馬疫錐蟲為底物):特異≥ 1:10酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA):敏感≥100,書寫習(xí)慣：抗dsDNA-IF (+) 1:320/ ELISA:

8、 >800U/L,抗dsDNA-SLE特異性抗體,與SLE疾病活動(dòng)相關(guān)，陽性者即使目前病情穩(wěn)定，80%在5年內(nèi)出現(xiàn)病情活動(dòng)。,抗組蛋白抗體AHA,組蛋白是染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)核小體的重要組成部分.由H1，H3,H2A,H2B,H4組成在多種自身免疫性結(jié)締組織?。ㄈ鏢LE、SS、RA、SSC)中出現(xiàn)；藥物引起的狼瘡中陽性率達(dá)95%. 不同藥物所致的抗組蛋白的亞單位抗體不同異煙肼：H1,H2A,H2B,H3和H4的滴度基本一致

9、肼苯噠嗪：抗H3和抗H4抗體普魯卡因酰胺：抗H2A-2B復(fù)合物抗體.,抗ENA抗體（4+7）,抗ENA抗體（4+7）,雙擴(kuò)散-4（特異） 抗Sm 抗SSA 抗SSB 抗RNP（抗U1RNP）滴度： 1：1 1：4 1：16,免疫印跡-7（敏感） 抗Sm 28/29/13.5KD 抗SSA 52/60KD 抗SSB

10、45/47KD 抗RNP 73/32/17.5KD 抗Jo-1 55KD 抗Scl-70 70/86KD 抗rRNP 38/16.5/15KD,后3個(gè)可單開雙擴(kuò)散法,抗ENA的測(cè)定-免疫雙擴(kuò)散法,不同稀釋倍數(shù)僅第一種為陽性,免疫印跡法,正確看待免疫印跡法的檢測(cè)結(jié)果,免疫印跡中條帶只表明在電場(chǎng)泳動(dòng)中出現(xiàn)1）分子量相同的區(qū)帶，2）由于形狀、所帶電荷而泳動(dòng)速度相同可造成不同分子量蛋白在相同部位出現(xiàn)條帶

11、免疫印跡中的多肽抗體并不一定是某種特異性抗體印跡陰性并不代表該抗體一定陰性 片段的集合≠完整蛋白,片段的出現(xiàn)是否齊備與雙擴(kuò)散法相互驗(yàn)證與臨床是否吻合,雙擴(kuò)散法：針對(duì)整蛋白（有二級(jí)結(jié)構(gòu)），更特異,抗Sm抗體,抗原：核內(nèi)小核糖核蛋白，其抗原決定簇主要在與u1,u2,u4--u6RNA連接的B和D蛋白多肽上三條帶同時(shí)出現(xiàn)時(shí)有一定意義抗Sm抗體陽性往往 抗RNP抗體陽性--linksetSLE中陽性率：30%左右， SLE的標(biāo)

12、記抗體，幾乎只出現(xiàn)于SLE與疾病活動(dòng)度不相關(guān),抗RNP抗體,抗核內(nèi)的核糖核蛋白（u1RNP抗體） 若抗Sm抗體陽性，抗U1RNP往往也陽性-linkedset 抗RNP抗體陽性常出現(xiàn)抗Sm抗體28、29KD 高滴度抗RNP抗體是MCTD的特異性抗體區(qū)分CTD與非CTD25~30%SLE出現(xiàn)抗RNP陽性與雙手腫脹,雷諾氏現(xiàn)象,肌炎和指(趾)端硬化和肺動(dòng)脈高壓相關(guān),抗SSA、SSB抗體,抗SSA多在胞漿中，52KD與SS

13、相關(guān)，60KD與SLE相關(guān)抗SSA在SLE中陽性率40%，抗SSB在SLE中陽性率 10-15%抗SSB陽性，抗SSA也應(yīng)陽性；抗SSA陽性，抗SSB可以陰性母親抗SSA和抗SSB抗體陽性——新生兒狼瘡及嬰兒心臟傳導(dǎo)阻滯常與亞急性皮膚型狼瘡、平滑肌受累、光過敏、血管炎、皮損、紫癜、淋巴結(jié)腫大、高球/RF↑、NS損傷、WBC減少、晚發(fā)SLE有關(guān),故ANA-時(shí)，SSA可+,抗rRNP抗體,抗原：核糖體60s亞基P0，P1，P2磷酸化

14、蛋白，主要位于胞漿與SLE中樞神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)相關(guān)對(duì)SLE高度特異，出現(xiàn)于10~15%的SLE常常在SLE活動(dòng)期中存在,與抗dsDNA的消長(zhǎng)相平行,但其不會(huì)隨病情的緩解立即消失,可持續(xù)1-2年后才轉(zhuǎn)陰,與SLE病情活動(dòng)性不完全同步,抗Scl-70抗體,抗原：DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶1硬皮?。⊿Sc）中抗Scl-70陽性率40%左右，為SSc的標(biāo)記抗體，提示彌漫性SSc雙擴(kuò)散法：小牛胸腺浸出物與肺間質(zhì)病有關(guān)--抗Scl-70陽性SD病人

15、,發(fā)生肺間質(zhì)病變的危險(xiǎn)性較抗Scl-70陰性的SD病人增加10倍，陽性者易出現(xiàn)皮膚硬化快速進(jìn)展和SRC,抗Jo-1抗體,抗原是組氨酰tRNA合成酶，胞漿中PM/DM的標(biāo)記抗體PM/DM病人中25~35%陽性，合并肺間質(zhì)變的PM/DM病人中高達(dá)60~70%陽性抗Jo-1抗體綜合征：急性發(fā)熱,對(duì)稱性關(guān)節(jié)炎,技工手,雷諾現(xiàn)象,肌炎并肺間質(zhì)變,三炎：肌炎、關(guān)節(jié)炎、間質(zhì)性肺炎三癥：發(fā)熱、技工手、雷諾,肌炎特異性抗體MSA,PL-7：蘇氨酰

16、tRNA合成酶PL-12：丙氨酰tRNA合成酶EJ：甘氨酰tRNA合成酶OJ：異亮氨酰tRNA合成酶KS：天冬酰tRNA合成酶Mi-2：組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶復(fù)合物的解旋酶組分（H）Ku：DNA結(jié)合蛋白（SN）SRP：信號(hào)識(shí)別顆粒,◎抗合成酶抗體 發(fā)熱 關(guān)節(jié)炎 雷諾現(xiàn)象 技工手 間質(zhì)性肺炎,◎抗SRP 陽性率4% 秋季急性起病 多發(fā)性肌炎 嚴(yán)重肌無力 累及心臟 死亡率較高,

17、◎抗Mi-2 陽性率15~20% 95%DM 皮膚病變： 披肩疹、 V形癥,肌炎特異性抗體MSA,皮膚病變?yōu)橹?，肌炎輕,ACA（抗著絲點(diǎn)抗體）,抗原為CENP-A、B、CCREST(軟組織鈣化,雷諾現(xiàn)象,食道功能障礙,指端硬化,毛細(xì)血管擴(kuò)張)綜合征80%陽性（ calcinosis/Raynaud phenomena /esophageal Dysmotility /sclerodactyly/tela

18、ngiectasia ）在SS和自身免疫性肝病中也可存在PBC中陽性率53.5%，陽性者易出現(xiàn)門脈高壓和消化道出血ACA陽性的SS更易出現(xiàn)淋巴瘤，高球少，RP多,抗PCNA（抗增殖性核抗原）：抗原-DNA多聚酶δ的輔因子對(duì)SLE高度特異，陽性率低1~5%,SLE特異，但陽性率低,ANuA（抗核小體抗體）,對(duì)SLE的特異性>98%可見于藥物性狼瘡早期SLE、非活動(dòng)期SLE檢出率高于抗dsDNA,,抗RNP與抗rRNP,

19、二者抗原不同，抗RNP的抗原是含尿嘧啶的核糖核蛋白，主要在核內(nèi)，而抗rRNP的抗原是主要在胞漿內(nèi)核糖體亞基中的磷酸蛋白抗RNP與雷諾現(xiàn)象、肺動(dòng)脈高壓相關(guān)，是MCTD的特異性抗體；抗rRNP與NPSLE相關(guān)，是SLE的特異性抗體,,,N Engl J med 358;9,CTD診斷時(shí)ANA的檢測(cè)策略,自身免疫性肝病,生化：1）轉(zhuǎn)氨酶增高 ALT、AST2）膽管酶增高 ALP、GGT（膽紅素、TBA）3）排除其他

20、病因：飲酒、病毒、藥物,自身免疫性肝炎-- AIH,,原發(fā)性膽汁性肝硬化 --PBC原發(fā)性硬化性膽管炎--PSC,,自身免疫性肝病,AIH抗體譜,PBC抗體譜,ANAa-SMAa-KLMa-SLA,AMAAMA-M2Gp210SP100,自身免疫性肝病的抗體譜,AIH Ⅰ型 ANA、a-SMA、pANCA Ⅱ型 抗KLM、抗LC1 Ⅲ型

21、 抗SLA/LPPBC AMA-M2 抗gp210、抗SP-100PSC ANA、a-SMA、 ANCA,自身免疫性肝病抗譜,鼠肝鼠腎-KLM,鼠胃-抗平滑肌抗體；抗肌動(dòng)蛋白抗體,Hep2-抗核點(diǎn)抗體；鼠肝-ANA,鼠腎-AMA；猴肝-SLA,AMA,抗細(xì)胞漿成分：靶抗原-丙酮酸脫氫酶

22、E2（PDC-E2）和X蛋白AMA-M2 在PBC中陽性率96%，特異性97%；滴度與疾病嚴(yán)重度和預(yù)后不相關(guān)M1~M9 AMA-M2、M9---預(yù)后好 AMA-M4、M8---預(yù)后差,對(duì)優(yōu)思弗效果佳,AMA亞型抗體種類及其疾病相關(guān)性,PBC中出現(xiàn)的自身抗體及意義,抗磷脂抗體,肺栓塞,布-加綜合征,下腔靜脈血栓,腸缺血,腸穿孔,脾梗塞,腎梗塞腎靜脈血栓腎衰竭,

23、心肌梗塞,Addison,,腎上腺,骨梗死,腦梗塞,CRVOCRAO,,眼,,胰腺炎,流產(chǎn)、早產(chǎn)、宮內(nèi)發(fā)育遲緩、先兆子癇,什么時(shí)候想到APS？,靜脈血栓、動(dòng)脈栓塞、病理妊娠APTT延長(zhǎng)（體內(nèi)高凝、體外不凝）,APTT與糾正實(shí)驗(yàn),即刻、孵育2h均不能被糾正→加入磷脂可糾正,抗磷脂（Phospholipid）抗體,狼瘡抗凝物 抗心磷脂抗體 梅毒血清試驗(yàn)假陽性（RPR+，TPPA確證陰性） β2GP1β2GP1（

24、載脂蛋白）與磷脂結(jié)合，改變表面結(jié)構(gòu)，暴露抗原決定簇，介導(dǎo)抗磷脂抗體結(jié)合到膜磷脂。β2GP1是必需的輔助因子，測(cè)β2GP1可能比測(cè)ACL更有意義。動(dòng)靜脈血栓形成、血小板減少、習(xí)慣性流產(chǎn)、神經(jīng)精神狼瘡有關(guān),系統(tǒng)性血管炎,ANCA血管炎抗體譜：ANCA+AECA,血管大小的定義,大血管--主動(dòng)脈及一級(jí)分支中等血管：肌性動(dòng)脈和小動(dòng)脈 內(nèi)膜∣彈力層∣肌層∣外膜小血管—毛細(xì)血管和后微靜脈、微動(dòng)脈,,,

25、ANCA,以中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞胞漿成分為靶抗原靶抗原：PR3，MPO、乳鐵蛋白酶、彈性蛋白酶、組織蛋白酶、殺菌/通透性蛋白C-ANCA（胞漿型）：主要抗原PR3 P-ANCA（核周型）：主要抗原MPO書寫：ANCA（+）P 1：20，MPO-ANCA…，PR3-ANCA…,P-ANCA,C-ANCA,不同疾病中出現(xiàn)的ANCA,pANCA（核周型）,pANCA ≠M(fèi)PO ANCA特異性較差，MPA（60%-80%），EP

26、GA IBD，PSC、PAN、SLE、RA、SS與壞死性新月體腎小球腎炎NGGN相關(guān)，且與疾病活動(dòng)度相平行,cANCA（胞漿型）,cANCA，其抗原主要是中性粒細(xì)胞顆粒內(nèi)的和單核細(xì)胞溶酶體的絲氨酸蛋白酶3cANCA≠PR3 ANCA GPA中特異性為95%，與疾病活動(dòng)性平行少數(shù)MPA、CSS、PAN等也可陽性,類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)抗體,類風(fēng)濕因子（Rheumatoid

27、Factor）,靶抗原為IgG的FC片段，是抗IgG的Ig與疾病活動(dòng)性有關(guān)陽性不足以診斷RA，陰性不能除外RA多種結(jié)締組織?。⊿LE，SD，SS，PM/DM）、感染疾?。⊿BE，TB，hepatitis）、肝硬化 、結(jié)節(jié)病、淋巴瘤等均可陽性，正常人2%陽性，老年人可達(dá)5%陽性冷球蛋白血癥、SS可出現(xiàn)RF高滴度陽性病后半年才產(chǎn)生，有關(guān)節(jié)外表現(xiàn)者滴度高。持續(xù)高滴度RF預(yù)示疾病嚴(yán)重，骨侵蝕發(fā)生率高，預(yù)后差兩次或多次陽性/高滴度陽性

28、/存在IgM、IgG、IgA型—對(duì)RA特異性提高,抗核周因子-(APF),靶抗原位于人頰粘膜細(xì)胞的核周顆粒中對(duì)RA診斷的敏感性35%，特異性高達(dá)91%RF陰性者40%陽性APF與疾病嚴(yán)重程度、關(guān)節(jié)外表現(xiàn)及放射學(xué)進(jìn)展相關(guān)，提示預(yù)后欠佳,抗角蛋白抗體-（AKA）,6周齡雄性Wistar大鼠的中1/3食道切片為底物以典型的角質(zhì)層板層狀、線狀沉積的熒光為陽性對(duì)RA診斷的敏感性32-44.13%、特異性89-90%RF陰性者34%陽性

29、與RA的病情嚴(yán)重程度相關(guān),提示預(yù)后不良,抗環(huán)瓜氨酸多肽(CCP)抗體,對(duì)RA診斷高度敏感（46.6%）和特異性（96.6%）可以在關(guān)節(jié)炎早期出現(xiàn), 與嚴(yán)重的骨關(guān)節(jié)破壞相關(guān)與APF、AKA 以及HLA-DR4 之間有相關(guān)性,與RF 之間無相關(guān)性,抗 MCV（ mutated citrullinated vimentin  ）(突變型瓜氨酸波形蛋白),敏感性高，聯(lián)合抗CCP提高診斷敏感性與RA嚴(yán)重程度和疾病活動(dòng)度有一定相

30、關(guān),,抗GPI(葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶),敏感性25%，特異性80%，與RA關(guān)節(jié)外受累相關(guān),5% 早期RA18% RA 類風(fēng)濕結(jié)節(jié)45% 類風(fēng)濕血管炎92% RA felty,其它抗體,抗血小板抗體：免疫性血小板減低抗GBM抗體、抗TBM抗體抗甲狀腺球蛋白抗體: 亞甲炎,皮膚組織自身免疫性疾病相關(guān)自身抗體?天皰瘡自身抗體譜：抗天皰瘡抗體（抗棘細(xì)胞間抗體）、抗橋?？贵w（抗Dsg-1抗體、抗Dsg-3抗體） 大皰性類天

31、皰瘡自身抗體譜：抗類天皰瘡抗體（抗表皮基底膜抗體）BP180和BP230,與疾病活動(dòng)度相關(guān)的抗體,抗dsDNA—SLEACL-----APSANCA---GPA、MPARF/a-MCV--RA,有爭(zhēng)議,抗體 vs 臨床表現(xiàn)—連連看,抗SSA 抗dsDNA抗RNP抗rRNP抗Scl-70,廣泛皮膚硬化、肺間質(zhì)病變、SRC手腫脹、雷諾現(xiàn)象、肺高壓蛋白尿、鏡下血尿光過敏、皮疹、胎兒AVB精神癥狀、認(rèn)知功能障

32、礙,與NPSLE相關(guān)的抗體,抗rRNP抗磷脂抗體（與舞蹈病、癲癇病、脊髓病、中風(fēng)、認(rèn)知功能不全相關(guān)）抗NMDAR抗體（ N-甲基-D-門冬氨酸受體，抗dsDNA的一個(gè)組分，引起神經(jīng)元非炎癥性壞死，CSF中存在，與認(rèn)知障礙、抑郁狀態(tài)相關(guān)）抗神經(jīng)元抗體（CSF中滴度與NPSLE病情活動(dòng)相關(guān)）,F 21 精神癥狀 多動(dòng)癥 思維松散,GPA,MPA,F 83尿 pro trace，