食品生物技術(shù)基因工程復(fù)習(xí)題

1、復(fù)習(xí)題復(fù)習(xí)題一、名詞解釋基因重組基因重組(gene(generecombination)recombination)：是指DNA片段在細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞間，甚至在不同物種之間進(jìn)行交換，交換后的片段仍然具有復(fù)制和表達(dá)的功能?？寺。郝。簛碜酝皇甲娴南嗤北净蚩截惖募?。限制性內(nèi)切酶：限制性內(nèi)切酶：限制酶是在生物體(主要是微生物)內(nèi)的一種酶，能將外來的DNA切斷，由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進(jìn)行的，故名限制性內(nèi)切酶。黏性末端：黏性末端：被限

2、制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，他們之間正好互補(bǔ)配對，這樣的切口叫黏性末端。質(zhì)粒：質(zhì)粒：是染色體外能夠進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳單位，包括真核生物的細(xì)胞器和細(xì)菌細(xì)胞中核區(qū)外的DNA分子。基因：因：是一切生物體內(nèi)儲(chǔ)存遺傳信息的，有自我復(fù)制能力的遺傳功能單位。CDNACDNA：以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，生成的RNADNA中的DNA為CDNA。CCCDNACCCDNA：絕大多數(shù)的天然DNA質(zhì)粒具有共價(jià)、封閉、環(huán)狀的分子

3、結(jié)構(gòu)，即CCCDNA。生物技術(shù)：生物技術(shù)：是在細(xì)胞水平上，特別是在分子水平上對生物體遺傳性實(shí)現(xiàn)巨大的接近定向改造的一套內(nèi)容繁多和復(fù)雜的技術(shù)。DNADNA克?。ǚ肿涌寺?、基因克隆、重組克?。ǚ肿涌寺?、基因克隆、重組DNADNA）：）：應(yīng)用酶學(xué)方法，在體外將外源性遺傳性物質(zhì)與載體結(jié)合成重組DNA分子，繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞、篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞，再進(jìn)行擴(kuò)增、提取獲得大量同一DNA分子的過程?；匚慕Y(jié)構(gòu)：回文結(jié)構(gòu)：在切割部位，一條

4、鏈正向讀的堿基順序與另一條鏈反向讀的順序完全一致。同尾酶：同尾酶：來源各異，識(shí)別的靶子序列也各不相同，但都產(chǎn)生出相同的粘性末端。目的基因：目的基因：是人們所需要轉(zhuǎn)移或改造的基因。ＤＮＡ序列分析：ＤＮＡ序列分析：是指對某一段ＤＮＡ分子或片段的核苷酸排列順序測定，測得組成ＤＮＡ分子的Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ的排列順序基因轉(zhuǎn)移（基因轉(zhuǎn)移（transgenosistransgenosis）：）：是借助于物理、化學(xué)或生物的手段將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞，并檢查

5、其在該細(xì)胞內(nèi)表達(dá)情況的一種技術(shù)，是細(xì)胞工程中一項(xiàng)重要而應(yīng)用廣泛的技術(shù)。報(bào)告基因：報(bào)告基因：系指其編碼產(chǎn)物能夠被快速地測定，常用來判斷外源基因是否已經(jīng)成功地導(dǎo)入寄主細(xì)胞（器官或組織）并檢測其表達(dá)活性的一類特殊用途的基因選擇標(biāo)記基因：選擇標(biāo)記基因：簡稱選擇基因，是指可使被轉(zhuǎn)化的細(xì)胞獲得其親本細(xì)胞所不具備的新的遺傳特性，從而使得人們能夠使用特定的選擇培養(yǎng)基，將轉(zhuǎn)化的新細(xì)胞從親本細(xì)胞群體中選擇出來的一類特殊的基因基因探針：基因探針：是一段與目的

6、基因互補(bǔ)的核酸序列，可以是ＤＮＡ，也可以是ＲＮＡ，用它與待測樣品ＤＮＡ或ＲＮＡ進(jìn)行核酸分子雜交，可以判斷兩者的同源程度原位雜交：原位雜交：將標(biāo)記的核酸探針與固定在細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交，DotDot印跡雜交：印跡雜交：將待測ＤＮＡ或ＲＮＡ的細(xì)胞裂解物變性后直接點(diǎn)在硝酸纖維素膜上，不需要限制性酶進(jìn)行酶切，既可與探針進(jìn)行雜交反應(yīng)基因的轉(zhuǎn)移技術(shù)：基因的轉(zhuǎn)移技術(shù)：就是將外源目的基因或DNA片段引人受體生物或細(xì)胞并檢查其在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中表達(dá)結(jié)果的

7、一種技術(shù)。cDNAcDNA文庫文庫：是指某生物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的克隆的集合。RTPCRRTPCR:先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于mRNA，以寡聚dT為引物合成cDNA第一鏈，然后用已知一對引物，擴(kuò)增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCRmRNA反轉(zhuǎn)錄合成單鏈cDNA探針；(3)用不對稱PCR合成單鏈DNA探針。23.根據(jù)Nthern雜交的結(jié)果可以說明：外源基因是否進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄。24.RNA分子經(jīng)凝膠電泳后按大小不同分

8、開，然后被轉(zhuǎn)移到一張硝酸纖維素膜(尼龍膜)上，同一放射DNA探針雜交的技術(shù)稱Nthern印跡。25.在Southern印跡技術(shù)中，DNA限制性片段經(jīng)凝膠電泳分離后，被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(或尼龍膜)上，然后與放射性的DNA探針雜交。26.可用T4DNA聚合酶進(jìn)行平末端的DNA標(biāo)記，因?yàn)檫@種酶具有5’3’合成酶；和3’5’外切核酸酶的活性。27.根據(jù)外源片段提供的遺傳表型篩選重組體，必需考慮三種因素：(1)__克隆的是完整的基因；(2)__

9、使用的是表達(dá)載體；(3)不含內(nèi)含子。28.Nthern印跡和Southern印跡有兩點(diǎn)根本的區(qū)別：(1)_____印跡的對象不同：Nthern是RNA，Southern是DNA(2)__電泳條件不同，前者是變性條件，后者是非變性條件29.放射免疫篩選的原理基于以下三點(diǎn)：(1)___抗體能夠被吸附到固體支持物上；(2)_______同一個(gè)抗原可以同幾種抗體結(jié)合；(3)____抗體能夠被標(biāo)記_30.番茄在運(yùn)輸和貯藏過程中，由于過早成熟而易腐

10、爛。應(yīng)用基因工程技術(shù)，通過抑制某種促進(jìn)果實(shí)成熟激素的合成能力，可使番茄貯藏時(shí)間延長，培育成耐貯藏的番茄新品種，這種轉(zhuǎn)基因番茄已于1993年在美國上市。請回答：（1）促進(jìn)果實(shí)成熟的重要激素是乙烯。（2）在培育轉(zhuǎn)基因番茄的基因操作中，所用的基因的“剪刀”是限制性內(nèi)切酶，基因的“針線”是DNA連接酶，基因的“運(yùn)輸工具”是運(yùn)載體。（3）與雜交育種、誘變育種相比，通過基因工程來培育新品種的主要優(yōu)點(diǎn)是目的性強(qiáng)、育種周期短和克服遠(yuǎn)緣雜交的障礙。31.

11、科學(xué)家通過基因工程培育抗蟲棉時(shí)，需要從蘇云金芽孢桿菌中提取出抗蟲基因，“放入”棉的細(xì)胞中與棉的DNA結(jié)合起來并發(fā)揮作用，請回答下列有關(guān)問題：（1）從蘇云金芽孢桿菌中切割抗蟲基因所用的工具是限制性內(nèi)切酶，此工具主要存在于微生物中，其特點(diǎn)是一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，并在特定的位點(diǎn)切割。（2）蘇云金芽孢桿菌一個(gè)DNA分子上有許多基因，獲得抗蟲基因常采用的方法是“鳥槍法”。具體做法是：用限制性內(nèi)切酶將蘇云金芽孢桿菌的DNA切成許多

12、片段，然后將這些片段分別與運(yùn)載體結(jié)合，再通過運(yùn)載體轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓它們在各個(gè)受體細(xì)胞中大量復(fù)制，從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法把帶有目的基因的DNA片斷分離出來。（3）進(jìn)行基因操作一般要經(jīng)過的四個(gè)步驟是：提取目的基因、目的基因與載體結(jié)合、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測與表達(dá)。32、在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長。下圖為獲