免疫磁球的制備及其在大腸桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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1、免疫磁球是在表面上包被有抗原或抗體的,具有超順磁性、大小單一的磁性微球的統(tǒng)稱(chēng)。除了具有磁性外,免疫磁球還具有與靶分子特異性結(jié)合的能力。通過(guò)在表面包被不同的抗體或抗原,免疫微球可以與樣本中的不同物質(zhì)發(fā)生特異性結(jié)合,進(jìn)而達(dá)到快速分離富集或者檢測(cè)的目的。免疫磁球的獨(dú)特性能使其在環(huán)境工程和生物技術(shù)領(lǐng)域中具有良好的應(yīng)用前景。
  本論文以實(shí)驗(yàn)室自制的磁性微球?yàn)檩d體,包被抗體制成免疫磁球。考察了磁性微球類(lèi)型、抗磁比、包被時(shí)間、活化劑以及包被緩

2、沖液類(lèi)型對(duì)免疫磁球上抗體包被量的影響,并對(duì)所制備的免疫磁球進(jìn)行了穩(wěn)定性評(píng)價(jià),確定了免疫磁球制備的最優(yōu)條件,測(cè)定了在最優(yōu)條件下所制備的免疫磁球上的抗體包被量。最后應(yīng)用自制的免疫磁球去檢測(cè)水中大腸桿菌的濃度,確定了檢測(cè)的工作濃度,靈敏度和檢測(cè)限,并考察了封閉液和樣本離子強(qiáng)度對(duì)檢測(cè)方法的影響。
  實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)載體為聚苯乙烯/丙烯酰胺磁性微球,包被緩沖液為0.1mol/L Tris溶液,抗/磁比為20mg/g,包被時(shí)間2h,不使用活

3、化劑時(shí),免疫磁球上交聯(lián)的抗體量最多,達(dá)4.72mg/g;免疫磁球的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示,活化劑的使用能夠增強(qiáng)免疫磁球的穩(wěn)定性,但是同時(shí)抗體包被量有明顯下降;當(dāng)超聲分散前處理磁性微球15min時(shí),與未經(jīng)處理相比,所制備的免疫磁球穩(wěn)定性有明顯提高。
  利用自制的免疫磁球,采用夾心法檢測(cè)大腸桿菌稀釋液的濃度。當(dāng)使用3%牛血清白蛋白做封閉液,在37℃,150rpm的條件下封閉30min后,免疫磁球的信噪比最高,達(dá)1.87。菌液樣本離子濃度

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