免疫磁球的制備及其在大腸桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、免疫磁球是在表面上包被有抗原或抗體的，具有超順磁性、大小單一的磁性微球的統(tǒng)稱(chēng)。除了具有磁性外，免疫磁球還具有與靶分子特異性結(jié)合的能力。通過(guò)在表面包被不同的抗體或抗原，免疫微球可以與樣本中的不同物質(zhì)發(fā)生特異性結(jié)合，進(jìn)而達(dá)到快速分離富集或者檢測(cè)的目的。免疫磁球的獨(dú)特性能使其在環(huán)境工程和生物技術(shù)領(lǐng)域中具有良好的應(yīng)用前景。
　　本論文以實(shí)驗(yàn)室自制的磁性微球?yàn)檩d體，包被抗體制成免疫磁球。考察了磁性微球類(lèi)型、抗磁比、包被時(shí)間、活化劑以及包被緩

2、沖液類(lèi)型對(duì)免疫磁球上抗體包被量的影響，并對(duì)所制備的免疫磁球進(jìn)行了穩(wěn)定性評(píng)價(jià)，確定了免疫磁球制備的最優(yōu)條件，測(cè)定了在最優(yōu)條件下所制備的免疫磁球上的抗體包被量。最后應(yīng)用自制的免疫磁球去檢測(cè)水中大腸桿菌的濃度，確定了檢測(cè)的工作濃度，靈敏度和檢測(cè)限，并考察了封閉液和樣本離子強(qiáng)度對(duì)檢測(cè)方法的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)載體為聚苯乙烯/丙烯酰胺磁性微球，包被緩沖液為0.1mol/L Tris溶液，抗/磁比為20mg/g，包被時(shí)間2h，不使用活

3、化劑時(shí)，免疫磁球上交聯(lián)的抗體量最多，達(dá)4.72mg/g；免疫磁球的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，活化劑的使用能夠增強(qiáng)免疫磁球的穩(wěn)定性，但是同時(shí)抗體包被量有明顯下降；當(dāng)超聲分散前處理磁性微球15min時(shí)，與未經(jīng)處理相比，所制備的免疫磁球穩(wěn)定性有明顯提高。
　　利用自制的免疫磁球，采用夾心法檢測(cè)大腸桿菌稀釋液的濃度。當(dāng)使用3％牛血清白蛋白做封閉液，在37℃，150rpm的條件下封閉30min后，免疫磁球的信噪比最高，達(dá)1.87。菌液樣本離子濃度