藥物分析藥物的含量測(cè)定方法與驗(yàn)證（精品）

1、藥物分析,第四章 藥物的含量測(cè)定方法,主講: 秦大偉,,Company Logo,www.themegallery.com,前言,藥物的含量測(cè)定,是指藥物中所含的主成分的量，是評(píng)價(jià)藥物質(zhì)量的重要指標(biāo)。,定義,Company Logo,www.themegallery.com,前言,藥物的含量測(cè)定,化學(xué)、物理學(xué)、生物學(xué)、微生物學(xué)方法,基礎(chǔ),在規(guī)定條件下選用適當(dāng)微生物測(cè)定某物質(zhì)含量的方法。被測(cè)定的物質(zhì)可以是某些生物生長(zhǎng)所必需的維生素、氨

2、基酸等，也可以是抑制某些微生物生長(zhǎng)的抗生素、農(nóng)藥等。常使用的有液體稀釋法和固體平板擴(kuò)散法。,利用某些生物對(duì)某些物質(zhì)如維生素、氨基酸)的特殊需要，或?qū)δ承┪镔|(zhì)如激素、抗生素、藥物等)的特殊反應(yīng)來(lái)定性、定量測(cè)定這些物質(zhì)的方法。,化學(xué)反應(yīng),如UV光吸收特性、濁度,Company Logo,www.themegallery.com,前言,藥物的含量測(cè)定,基于化學(xué)或物理學(xué)原理的含量測(cè)定。,分兩類(lèi),基于生物學(xué)原理的效價(jià)測(cè)定。,基礎(chǔ),生物檢定法，微

3、生物檢定法，酶法。,目標(biāo),本章的目標(biāo)：含量測(cè)定。,P40：效價(jià)測(cè)定方法：凡以生物學(xué)方法或者酶學(xué)方法對(duì)藥品中的特定成分以標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照，作量反應(yīng)平行線測(cè)定方法進(jìn)行的生物活性（活力）測(cè)定,量反應(yīng)平行線測(cè)定方法：同時(shí)測(cè)定供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的劑量反應(yīng)曲線，且兩條反應(yīng)線必須具有平行性，即供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的活性只有量的區(qū)別，并無(wú)質(zhì)的區(qū)別,Company Logo,www.themegallery.com,前言,藥物的含量測(cè)定,容量分析法,三種分析方法,

4、光譜分析法,色譜分析法,特點(diǎn),操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確，耐用性高，但專(zhuān)屬性差,特點(diǎn),特點(diǎn),簡(jiǎn)便快速、靈敏度高，有一定的準(zhǔn)確度，但專(zhuān)屬性稍差,靈敏度與專(zhuān)屬性都高，有一定的準(zhǔn)確度，但結(jié)果需要對(duì)照品,適用于準(zhǔn)確度與精確度要求較高的樣品測(cè)定,適用于靈敏度要求較高，樣本量較大的分析項(xiàng)目,適用于專(zhuān)屬性和靈敏度要求較高的復(fù)雜樣品,Company Logo,www.themegallery.com,第一節(jié) 定量分析方法的分類(lèi)與特點(diǎn),容量分析法,定義,將已知濃

5、度的滴定液（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液），由滴定管滴加到被測(cè)藥物的溶液中，直至滴定液與被測(cè)藥物反應(yīng)完全（通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ㄖ甘荆?，然后根?jù)滴定液消耗的濃度和被消耗的體積，按化學(xué)計(jì)量關(guān)系式計(jì)算出被測(cè)藥物的含量。,亦稱(chēng),滴定法,通過(guò)指示劑顏色變化，或者電子設(shè)備的電位或電流突變來(lái)指示滴定終點(diǎn),,滴定終點(diǎn)和計(jì)量點(diǎn)不一致，就會(huì)引入滴定誤差，應(yīng)該盡量避免。,特點(diǎn),適用范圍,1、方法簡(jiǎn)便易行：所用儀器價(jià)廉易得，操作簡(jiǎn)便快速,廣泛應(yīng)用于化學(xué)原料的測(cè)定，較少應(yīng)用于藥物制劑

6、的測(cè)定,2、方法耐用性高：影響測(cè)定的試驗(yàn)條件與環(huán)境因素少,3、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確：誤差低于0.2%，滿(mǎn)足準(zhǔn)確度高樣品,4、方法專(zhuān)屬性差：對(duì)相近雜質(zhì)干擾缺少選擇，適用于主成分含量較高的樣品分析,?,,Company Logo,www.themegallery.com,第一節(jié) 定量分析方法的分類(lèi)與特點(diǎn),容量分析法有關(guān)計(jì)算,滴定度,每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物質(zhì)量?！吨袊?guó)藥典》用毫克（mg）表示。,例如,用碘量法測(cè)定維生素C的含量時(shí)，《

7、中國(guó)藥典》規(guī)定：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于8.806mg的維生素C（C2H8O6）,Company Logo,www.themegallery.com,第一節(jié) 定量分析方法的分類(lèi)與特點(diǎn),,被測(cè)藥物,,滴定液,容量分析法有關(guān)計(jì)算,滴定度計(jì)算,用B來(lái)滴定A,滴定液反應(yīng)的質(zhì)量,被測(cè)藥物反應(yīng)的質(zhì)量,被測(cè)藥物的摩爾質(zhì)量,滴定液的摩爾質(zhì)量,,,,,Company Logo,www.themegallery.com,第一節(jié) 定量分析

8、方法的分類(lèi)與特點(diǎn),容量分析法有關(guān)計(jì)算,滴定度計(jì)算,用B來(lái)滴定A,,滴定液,,待測(cè)液,,等于1ml,,濃度乘體積=nB,計(jì)算有一個(gè)從質(zhì)量到物質(zhì)的量，再到濃度再到滴定度的轉(zhuǎn)變過(guò)程,濃度mB,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),示例一 計(jì)算Vc的滴定度T,碘量法測(cè)定Vc含量[M(C6H6O6)=176.13]，C(I2)=0.05mol/L,Mb=0.05mol/L,1,1,MA=1

9、76.13,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),示例二 異煙肼的滴定度,溴酸鉀法測(cè)定異煙肼含量[M(C6H7N3O)=137.14]，C溴酸鉀=0.01667mol/L,a,b,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),,直接滴定法,間接滴定法,直接滴定法,在實(shí)際工作中，滴定液的濃度可能與藥典規(guī)定的濃度并不一致，所以應(yīng)該進(jìn)

10、行校正,,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),直接滴定法的含量計(jì)算方法,直接讀取,藥典規(guī)定,自己標(biāo)定,取樣量,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),間接滴定法,不直接對(duì)待測(cè)物進(jìn)行滴定，而采用間接途徑滴定,生成物滴定法,剩余量滴定法,,,,被測(cè)藥物與化合物A作用生成 化合物B，再用滴定液滴定化合物B,也稱(chēng)回滴法，本法先加

11、入定量過(guò)量滴定液A與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴定液A反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計(jì)算,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),間接滴定法的生成物滴定法,注意滴定度T的計(jì)算,,先計(jì)算T,再計(jì)算含量,請(qǐng)看下例,正確求a和b,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),示例三 葡萄糖酸銻鈉的含量測(cè)定,Sb5+——2S2O32-,,本法先

12、用葡萄糖酸銻鈉與碘離子反應(yīng)生成碘，再用碘與硫代硫酸鈉反應(yīng)生成碘離子，相當(dāng)于是用硫代硫酸鈉在滴定葡萄糖酸銻鈉，因此要找出它們兩者的量反應(yīng)關(guān)系，也就是a和b,滴定度T的計(jì)算示例如下,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),間接滴定法的生成物滴定法,注意滴定度T的計(jì)算,,請(qǐng)讀取,請(qǐng)校正,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),間接

13、滴定法的剩余量滴定法,也稱(chēng)回滴法，本法先加入定量過(guò)量滴定液A與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴定液A反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計(jì)算,,計(jì)算的關(guān)鍵在于求出滴定液A應(yīng)用于藥物反應(yīng)的實(shí)際量,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),間接滴定法的剩余量滴定法,也稱(chēng)回滴法，本法先加入定量過(guò)量滴定液A與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴定液A反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計(jì)算,,計(jì)算的關(guān)鍵在于求出滴定液A應(yīng)用

14、于藥物反應(yīng)的實(shí)際量,,常涉及化學(xué)反應(yīng)、加熱、分取等操作等步驟，使測(cè)定誤差顯著增加,空白試驗(yàn)校正,,沒(méi)有藥物存在時(shí)的滴定，方法步驟與有藥物存在時(shí)相同,,計(jì)算公式相應(yīng)修正如下：,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),間接滴定法的剩余量滴定法,也稱(chēng)回滴法，本法先加入定量過(guò)量滴定液A與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴定液A反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計(jì)算,,計(jì)算的關(guān)鍵在于求出滴定液A應(yīng)用于藥物

15、反應(yīng)的實(shí)際量,,常涉及化學(xué)反應(yīng)、加熱、分取等操作等步驟，使測(cè)定誤差顯著增加,沒(méi)有藥物存在時(shí)，滴定液A全部與滴定液B反應(yīng),藥物存在時(shí)，剩余滴定液A全部與滴定液B反應(yīng),濃度校正作用,Example as follows,,Company Logo,www.themegallery.com,示例四 司可巴比妥鈉的含量測(cè)定,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),取本品約0.1g，精密稱(chēng)定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振搖使溶解，精密加溴滴定液(0.

16、05mol/L) 25ml，再加鹽酸5ml，立即密塞，并振搖1min，在暗處放置15min后，注意微開(kāi)瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定得的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。,本法用溴與司可巴比妥鈉反應(yīng)，再用硫代硫酸鈉反滴定溴，屬反滴定法，并用空白試驗(yàn)校正,滴定液A為溴，B為硫代硫酸鈉，含量計(jì)算只需先求溴滴定度，再求出硫代硫酸鈉空白試驗(yàn)V0體積

17、與樣品測(cè)定體積Vs,Company Logo,www.themegallery.com,示例四 司可巴比妥鈉的含量測(cè)定,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),已知：司可巴比妥鈉M=260.23;司可巴比妥鈉與溴反應(yīng)摩爾=1:1； W=0.1022 g； 硫代硫酸鈉濃度校正因子=1.038 ； 供試品滴定Vs=15.73ml ;空白試驗(yàn)滴定V0 =23.21ml;,It’s very easy！,Company Logo,www.them

18、egallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),Notice！,本公式適用于空白校正情形,本公式適用于沒(méi)有做空白校正情形,見(jiàn)上例,見(jiàn)下例,見(jiàn)P146,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),習(xí)題一 剩余碘量法測(cè)定異煙肼含量,異煙肼在弱堿性溶液中，加定量過(guò)量的碘滴定液(0.1mol/L)氧化，反應(yīng)完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定(以淀粉為

19、指示劑)。,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),習(xí)題二 非那西丁含量測(cè)定,精密稱(chēng)取本品0.3630g加稀鹽酸回流1小時(shí)后，放冷，用亞硝酸鈉液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00ml。每1ml亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.92mg的C10H13O2N，請(qǐng)計(jì)算非那西丁的含量。,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定

20、量分析方法的特點(diǎn),光譜分析法,藥典收載,紫外可見(jiàn)分光度法,原子吸收分光光度法,紅外分光度法,熒光分析法,火焰光度法,本章講敘,紫外可見(jiàn)分光度法,熒光分析法,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),紫外可見(jiàn)分光度法,基于物質(zhì)對(duì)紫外區(qū)(200~400nm)和可見(jiàn)光區(qū)(400~760nm)的單色光輻射建立起來(lái)的光譜分析法,朗伯-比爾定律,基礎(chǔ),Company Logo,www.theme

21、gallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),紫外可見(jiàn)分光度法,方法特點(diǎn)與適用范圍,1、簡(jiǎn)便易行：本法使用的儀器價(jià)格比較低廉，操作簡(jiǎn)單，易于普及,2、靈敏度高：本法靈敏度可達(dá)10-7~10-4g/ml，適用于低濃度試樣分析,3、準(zhǔn)確度較高：本法誤差在2%~5%之間，適用于對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度要求較高的樣品,4、專(zhuān)屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對(duì)結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性。,本法比較少應(yīng)用于原料藥的含量測(cè)定，可用于制劑的含

22、量測(cè)定，更多的應(yīng)用于生物制劑的定量檢查,本法紫外區(qū)須選用石英比色皿，比色皿一般為1cm，吸光度在0.3~0.7之間為宜，選用最大吸收光波長(zhǎng)。,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),紫外可見(jiàn)分光度法含量測(cè)定方法,4種方法,對(duì)照品比較法,吸收系數(shù)法,計(jì)算光度法,比色法,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),紫外可見(jiàn)分光度法含

23、量測(cè)定方法,對(duì)照品比較法,分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液,對(duì)照品溶液的中所含被測(cè)藥物的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分規(guī)定量的100±10%,所用溶劑量?jī)烧呦嗤?在規(guī)定的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度.按下式計(jì)算結(jié)果,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),1.對(duì)照品比較法,紫外可見(jiàn)分光度法含量測(cè)定方法,對(duì)照品比較法,P16:將Cx用上述公式替代，即可通過(guò)實(shí)驗(yàn)求出各種含量。見(jiàn)書(shū)例。,對(duì)應(yīng)于稀

24、釋體積濃度,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),1.對(duì)照品比較法,紫外可見(jiàn)分光度法含量測(cè)定方法,對(duì)照品比較法,P16:制劑的標(biāo)示量:系指每一支、片或每一個(gè)單位制劑中含有主藥的重量(或效價(jià)）或含量或裝量。,P16:將Cx用上述公式替代，即可通過(guò)實(shí)驗(yàn)求出各種含量。見(jiàn)書(shū)例。,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),紫外可見(jiàn)分光度

25、法含量測(cè)定方法,吸收系數(shù)法,吸收系數(shù)法:引入吸光系數(shù)的含量計(jì)算方法,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),溶液,片劑,紫外可見(jiàn)分光度法含量測(cè)定方法,吸收系數(shù)法,g/ml,Mg轉(zhuǎn)化單位,請(qǐng)看例題,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),紫外可見(jiàn)分光度法含量測(cè)定方法,吸收系數(shù)法,例題,示例：鹽酸氯丙嗪注射液的含量測(cè)定：精密量取

26、本品適量（約相當(dāng)于鹽酸氯丙嗪50mg），置200ml量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000)稀釋至刻度，搖勻；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用鹽酸（9→1000)稀釋至刻度，搖勻；在254nm下測(cè)定吸光度，按鹽酸氯丙嗪的吸收百分系數(shù)計(jì)算，即得。,過(guò)程推導(dǎo),注射液，選溶液公式,如下：,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),紫外可見(jiàn)分光度法含量測(cè)定方法,吸收系數(shù)法,D為供試品溶液的稀

27、釋體積：共稀釋了200ml×100÷2=10000ml,2ml ?,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),吸收系數(shù)法,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),吸收系數(shù)法,固體試劑公式推導(dǎo)如下：,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),3.計(jì)算分光

28、光度法4.比色法（可能有實(shí)驗(yàn)，It’s very simple）看書(shū)！,Company Logo,www.themegallery.com,特點(diǎn)： 靈敏度高，可達(dá)10-10～10-12g/ml 要求低濃度下測(cè)定 須做空白測(cè)定 熒光弱的藥物可衍生化后測(cè)定,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),(二)熒光分析法,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),(三)色譜分析法,1.HPLC,

29、1.1 內(nèi)標(biāo)法,As：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積或者峰高AR: 對(duì)照品的峰面積或者峰高Cs: 內(nèi)標(biāo)物質(zhì)濃度CR：對(duì)照品濃度,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),As’：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積或者峰高Ax: 供試品的峰面積或者峰高Cs’: 內(nèi)標(biāo)物質(zhì)濃度f(wàn)：校正因子,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),(三)色譜分析法,1.HPL

30、C,示例一 炔諾酮的含量測(cè)定,照高效液相色譜法(附錄ⅤD測(cè)定),色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(65:35)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為244nm。理論塔板數(shù)按炔諾酮峰計(jì)算不低于1500，炔諾酮峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度及主成分峰后一雜質(zhì)峰與主成分峰的分離度均應(yīng)符合要求。內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取黃體酮約25mg，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。,Company Logo,www.themeg

31、allery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),測(cè)定法 取本品約25mg，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液2ml與內(nèi)標(biāo)溶液3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜儀，記錄色譜圖；另取炔諾酮對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，同法測(cè)定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。,Company Logo,www.themegallery.com,2.GC,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn)

32、,示例 松節(jié)油的含量測(cè)定,照氣相色譜法(附錄Ⅵ E測(cè)定),色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用聚乙二醇(PEG)-20M為固定相，涂布密度為20%；柱溫為90°C。理論塔板數(shù)按α-蒎烯峰計(jì)算應(yīng)低于1500。校正因子測(cè)定 取正丁醇適量，精密稱(chēng)定，加石油醚(30～60°C)制成每1ml含20mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取α-蒎烯對(duì)照品約30mg，精密稱(chēng)定，置10ml棕色量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加石油醚(30～60&#

33、176;C)至刻度，搖勻，吸取1μl注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn),測(cè)定法 取本品約35mg，精密稱(chēng)定，置10ml棕色量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml，用石油醚(30～60°C)溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取1μl注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品含α-蒎烯(C10H16)不得少于70%。,Company Logo,www.the

34、megallery.com,,外標(biāo)法:,標(biāo)準(zhǔn)加入法:,Company Logo,www.themegallery.com,,第二節(jié) 定量分析樣品的前處理方法,不經(jīng)有機(jī)破壞,經(jīng)有機(jī)破壞,,直接測(cè)定,,配位滴定法氧化還原滴定法,水解后測(cè)定,,酸水解堿水解,經(jīng)還原分解后測(cè)定,,濕法破壞——?jiǎng)P氏定氮法,干法破壞,,高溫灼燒法氧瓶燃燒法,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析樣品的前處理方法,(

35、一)、直接測(cè)定法,葡萄糖酸鈣 EDTA配位滴定 富馬酸亞鐵 鄰二氮菲-硫酸鈰滴定 葡萄酸銻鈉 間接碘量法,(二)、經(jīng)水解后測(cè)定法,適用范圍：金屬原子不直接于碳原子相連或某些C-M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物。,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析樣品的前處理方法,1、堿水解法,銀量法返滴定,2、酸水解法,適用范圍：含鹵素有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物。,,,EDTA配位滴

36、定,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析樣品的前處理方法,(三)、經(jīng)還原分解后測(cè)定法,適用范圍：碘原子直接與芳環(huán)連接的含碘有機(jī)化合物。,碘他那酸,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析樣品的前處理方法,三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法,含氮、硫、硫柳汞、氯化鈉的生物制品、含氮有機(jī)合成藥物測(cè)定的前處理和生物制品中金屬元素測(cè)定時(shí)生物基質(zhì)的去除。,H2SO4

37、-HNO3 H2SO4-HClO4 H2SO4-H2SO4 HNO3-KMnO4,,分解劑/消化劑,,輔助分解劑,——?jiǎng)P氏定氮法,測(cè)定含有氨基和酰胺結(jié)構(gòu)的藥物結(jié)構(gòu),(一)濕法破壞,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析樣品的前處理方法,原 理,將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子中有機(jī)結(jié)構(gòu)被“消化”成CO2和H2O，有機(jī)結(jié)合的氮轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)氮，與過(guò)量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸

38、銨，經(jīng)堿化后釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。,,常量法——含氮量 25～30mg 半微量法——含氮量 1.0～2.0mg,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析樣品的前處理方法,凱氏燒瓶,,K2SO4(提高消解溫度)CuSO4(加快消解速度),,硫酸,,堿液,,硼酸(吸收液)甲基紅-溴甲酚綠指示劑,硫酸滴定空白校正,先用強(qiáng)酸水解,再用

39、含堿硫代硫酸鈉中和,最后用堿釋放出氨氣 ，并蒸餾出之,Company Logo,www.themegallery.com,(二)干法破壞,1.高溫灼燒法,用于含鹵素、含磷藥物和藥物中砷鹽的檢查。常加入無(wú)水碳酸鈉、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。,2.氧瓶燃燒法,,第二節(jié) 定量分析樣品的前處理方法,系指將含有待測(cè)元素的有機(jī)藥物置于充滿(mǎn)氧氣的密閉的密閉的燃燒瓶中充分燃燒，使有機(jī)結(jié)構(gòu)部分徹底分解為CO2和H2O，待測(cè)元素根據(jù)電負(fù)性的不同

40、轉(zhuǎn)化為不同價(jià)態(tài)的氧化物，被吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，再根?jù)其性質(zhì)和存在方式選擇方法進(jìn)行分析。,Company Logo,www.themegallery.com,第二節(jié) 定量分析樣品的前處理方法,燃燒時(shí)待測(cè)物轉(zhuǎn)化成不同價(jià)態(tài)的無(wú)機(jī)物以供測(cè)定,濾紙包裝樣品,Company Logo,www.themegallery.com,第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證,藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則

41、微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則,目的： 證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求效能指標(biāo)： 評(píng)價(jià)分析方法的尺度,效能指標(biāo)包括: 精密度, 準(zhǔn)確度, 檢測(cè)限,定量限,選擇性, 線性與范圍, 耐用性,Company Logo,www.themegallery.com,第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證,一、準(zhǔn)確度（accuracy）,系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度。,(一)含量

42、測(cè)定方法,回收率(Recovery),回收試驗(yàn),加樣回收試驗(yàn),3×3，至少9個(gè)測(cè)定結(jié)果,Company Logo,www.themegallery.com,第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證,二、精密度(Precision),系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之接近的程度。,表示：偏差(d)、標(biāo)準(zhǔn)偏差(s),、 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),重復(fù)性: 同一實(shí)驗(yàn)室,同一人多次測(cè)定的精密度中間精

43、密度: 同一實(shí)驗(yàn)室，不同人，不同儀器測(cè)定的精密度 重現(xiàn)性: 不同實(shí)驗(yàn)室，不同人測(cè)定的精密度,Company Logo,www.themegallery.com,第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證,三、專(zhuān)屬性(Specificity),指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。,目視法信噪比法 S/N=3,四、檢測(cè)限(Limit of Detection, LOD),藥物

44、能被檢出的最低濃度(µg/ml),,五、定量限(Limit of Quantitation, LOQ),藥物能被定量測(cè)定的最低濃度(µg/ml),信噪比法 S/N=10,Company Logo,www.themegallery.com,第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證,影響因素：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，流動(dòng)相的組成和pH，商品柱的品牌，柱溫等,六、線性與范圍(Linearity And Range),待測(cè)結(jié)果(響應(yīng)值)與試樣中

45、被測(cè)物的濃度或量直接成正比關(guān)系的程度。 Y=a+bx （r=0.9999),七、耐用性(Robustness),測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響程度,Company Logo,www.themegallery.com,第三節(jié) 藥品分析方法的驗(yàn)證,①,①已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度,②如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充,②,③視具體情況予以驗(yàn)證,③,Company Logo,www.themegallery.