1.趨化因子及其受體在結(jié)核桿菌感染巨噬細胞中的基因表達譜變化;2.大腸桿菌分支桿菌穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建

1、復(fù) 旦 大 學(xué) 博 士 后 研 究 工 作 報 告 ( 2 0 0 3 )摘 要結(jié)核分支桿菌是已 經(jīng)發(fā)現(xiàn)的 最為重要的傳染性病原體， 每年可以引 起 2 - 3百 萬人感染結(jié)核病。 結(jié)核分支桿菌是典型的 胞內(nèi) 致病菌， 它可以 在宿主巨 噬細胞內(nèi) 存活。 巨 噬細胞和結(jié)核分支桿菌的 初始相互作用中免疫調(diào)節(jié)因子 ( 包括細胞因子、 趨化因子及其它們的 受體) ， 在細菌能否引起機體發(fā)病中可能 起著關(guān)鍵作用。目 前， 對于結(jié)核桿菌感染中 趨

2、化因 子和趨化因子受體的了 解十分有限。 為了弄清楚 趨化因子和趨化因子受體在結(jié)核桿菌感染的巨 噬細胞中的變化， 我們利用活化的 人巨 噬細胞系U 9 3 7 作為結(jié)核桿菌感染的體外模型， 應(yīng)用基因芯片檢測技術(shù)、半定量 P C R 、流式細胞術(shù)等手段來研究巨噬細胞在不同 感染階段 ( 6小時，1 2小時 和 2 4 小時)的 趨化因子和趨化因子受體的表達譜?；蛐酒慕Y(jié)果顯示，結(jié)核分支桿菌 H 3 7 R v感染巨噬細胞 6小時和 1

3、2 小時都可以檢測到有變化的基因， 感染 2 4 小時，有明顯上調(diào)的基因有 2 5 條，其中顯著上調(diào)的基因有 2 2 條。在 所有 被檢測的7 7 條基因 中， 只有D 6 h o m o l o g 的 基因 是顯著下調(diào)的。 半定量R T - P C R證實了部分基因 ( I L - 8 , MI P 1 - a ， R A N T E S , C X C R 4 和 C C R 5 ) 的芯片 檢測結(jié)果。流式細胞術(shù)的結(jié)果顯示

4、H 3 7 R v的感染可以引 起 U 9 3 7 共表達趨化因 子受體 C C R 5 和 C X C R 4 。 此外， 為了獲得更為有效的T B 疫苗， 我們利用 G F P作為 報告基因，分支桿菌 H S P 7 0 的啟動子作為在分支桿菌中 調(diào)控外源基因表達的 啟動子構(gòu)建了并初步在恥垢分支桿菌和 B C G中得到了 表達。總之， 本研究建立了 相對簡單、易于獲得、 用于研究巨 噬細胞和 H 3 7 R v 相互作用的體外模型。

5、 趨化因子和受體基因表達譜顯示， H 3 7 R v感染巨噬細胞可以引 起2 5 條基因表達的明 顯上調(diào)和一條基因表達的顯著下調(diào)。 H 3 7 R v 還可以 引起 U 9 3 7 共表達趨化因子受體 C X C R 4和 C C R 5 ，為今后的蛋白藥物靶點設(shè)計和傳 染 病防 治 打 下了 基礎(chǔ)。 除 此 之 外， 大 腸桿 菌一 分 支 桿 菌穿 梭 質(zhì) 粒p O L Y G - 2 的成功構(gòu)建也為研制新型重組B C G打下良 好

6、基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞 趨化因子和趨化因子受體; U 9 3 7 細胞系; 結(jié)核分支桿菌; H 3 7 R v ;大腸桿菌一分支桿菌穿 梭質(zhì)粒復(fù) 旦 大 學(xué)博 士后 研 究工 作 報告 ( 2 0 0 3 )i n t e r a c t i o n b e t w e e n M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s a n d i t s h o s t c e l l

7、 i n t h e i n i t i a li n f e c t i o n . T h e r e a r e m o r e t h a n 2 0 g e n e s c o u l d b e u p - r e g u l a t e d a n d o n l y o n e g e n ec o u l d b e d o w n r e g u l a t e d i n U

8、 9 3 7 b y i n f e c t i o n w i t h H 3 7 R v . A n d i n f e c t i o n w i t hH 3 7 R v c o u l d c a u s e c o - e x p r e s s i o n o f C X C R 4 a n d C C R 5 o n t h e s u r f a c e o f i n f e c

9、 t e dU 9 3 7 . I n a d d i t i o n , t h e c o n s t r u c t i o n o f E . c o l i - M y c o b a c t e r i a s h u t l e p l a s m i dp O L Y G - 2 w i l l c o n t r i b u t e t o d e v e l o p r e c o m b i

10、 n a n t B C G . .K e y w o r d st u b e r c u l o s i sc h e mo k i n e s a n d t h e i r U 9 3 7 c e l l l i n e ; M y c o b a c t e r i u mH 3 7 R v ; E . c o l i - M y c o b a c t e r i a s h u t t l e p l a