mdamb231pcdna3.1syk(s)乳腺癌細(xì)胞株的建立及對(duì)細(xì)胞增殖影響的初步探討

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師( 或指導(dǎo)小組) 的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生簽名立榮＼炙導(dǎo)師簽章河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)所有。月詔日本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究

2、工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：土芡炎 聊麟數(shù)弘腳年鄉(xiāng)月詔日中文摘要M D A —M B 一2 3 1 p c D N A 3 ．1 ／S y k ( s ) - 孚L 腺癌細(xì)胞株的建立及對(duì)細(xì)胞增殖影響的初步探討摘 要惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類生命健康的一類疾病，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多步驟、多因素參與的過

3、程，其本質(zhì)體現(xiàn)在基因水平的變化，如原癌基因的異常活化和( 或) 抑癌基因失活和缺失及其引起相關(guān)蛋白產(chǎn)物的變化，相應(yīng)的引起了細(xì)胞出現(xiàn)持續(xù)性分化，自主性增殖，凋亡受限等最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生及侵襲、轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)。而研究發(fā)現(xiàn)超過5 0 ％的原癌基因及抑癌基因產(chǎn)物均有蛋白酪氨酸激酶( p r o t e i n t y r o s i n ek i n a s e s ，P T K s ) 活性，近些年研究較多的脾酪氨酸激酶( S p l e e n

4、 t y r o s i n ek i n a s e ，S y k ) 是跏堪因的蛋白產(chǎn)物，屬一種非受體型蛋白酪氨酸激酶，其轉(zhuǎn)錄過程選擇性拼接可出現(xiàn)二種異構(gòu)體，即全長(zhǎng)型S y k ( L ) 矛N 縮短型S y k ( S ) ，二者在D E L 功能域上相差- f 2 3 個(gè)氨基酸，故其在功能上也存在差異，國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)S y k ( L ) 在乳腺癌、胃癌、肺癌、肝癌等多種腺上皮來源的腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移起抑制作用，對(duì)于其作用機(jī)制及作為

5、治療靶點(diǎn)的體外研究也也越來越清晰。但對(duì)于縮短型S y k ( S ) ，有學(xué)者認(rèn)為其可能發(fā)揮癌基因功能，目前對(duì)其研究較少，更是缺乏S y k ( S ) 在腫瘤中作用機(jī)制研究。目的：本實(shí)驗(yàn)擬通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染建立穩(wěn)定表達(dá)S y k ( S ) 的乳腺癌細(xì)胞株，并初步探討S y k ( S ) 基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞增殖功能的影響。方法：1 S y k ( S ) 基因重組質(zhì)粒的擴(kuò)增及質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染S y k 陰性表達(dá)乳腺癌M D A —M B ．2

6、3 1 細(xì)胞株的建立1 ．1 質(zhì)粒擴(kuò)增及細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染：將攜帶S y k ( S ) 基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至D H 5 a 大腸桿菌中進(jìn)行擴(kuò)增，并使用脂質(zhì)體法將攜帶S y k ( S ) 基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至$ 尼陰性表達(dá)的乳腺癌M D A —M B ．2 3 l 細(xì)胞系，經(jīng)G 4 1 8 篩選獲得基因穩(wěn)定表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株( M D A —M B ．2 3 l p c D N A 3 ．1 ／S y k ( S 、) ) 。并以S y k 基因陽