茯磚茶中“金花”菌產孢機制及其功能性研究.pdf

1、茯磚茶是經(jīng)獨特“發(fā)花”工藝形成的一種后發(fā)酵茶，其“發(fā)花”過程是優(yōu)勢菌“金花”菌大量繁殖的過程，多數(shù)研究表明“金花”菌是冠突散囊菌。冠突散囊菌獨特的生長、繁殖和代謝過程，使茯磚茶具有消食健胃、調脂降壓和降脂減肥等保健功能，不同營養(yǎng)物質和培養(yǎng)條件對冠突散囊菌的生長及茯磚茶的“發(fā)花”過程產生影響，從而引起功能性成分和茯磚茶品質的變化。
　　本研究以冠突散囊菌為菌種，研究了冠突散囊菌在不同營養(yǎng)及培養(yǎng)條件下的產孢規(guī)律、黃色素變化規(guī)律，以及孢

2、子產生與黃色素之間的關系；采用薄層層析(TLC)、高效液相色譜(HPLC)以及紅外光譜(IR)分析法對冠突散囊菌所產生的黃色素和降脂類物質進行了初步分析研究。得出以下結果：
　　1.以冠突散囊菌的菌落形態(tài)、菌落直徑、有性孢子和無性孢子的數(shù)量、黃色素的吸光度為指標，通過改變CZG培養(yǎng)基的碳源(蔗糖、葡萄糖)和碳源的濃度(1％、3%、5%、7%、10%-90%)、氮源(硝酸鈉、硝酸銨、硫酸銨)和氮源的濃度(0.1%、0.3%、0.5%

3、、0.7%、1%、3%-11%)、無機鹽(氯化鈉、氯化鉀)和無機鹽的濃度(1%-17%)、培養(yǎng)溫度(15℃、20℃、25℃、28℃、32℃、35℃、40℃)以及培養(yǎng)基的pH(3-9)，探尋不同營養(yǎng)條件下冠突散囊菌的產孢規(guī)律和黃色素變化規(guī)律。單因素和正交試驗表明：冠突散囊菌產有性孢子和黃色素的最佳條件：蔗糖3%、硝酸銨0.7%、氯化鉀3%、培養(yǎng)溫度28℃、pH為7，冠突散囊菌黃色素的含量與有性孢子數(shù)量成正相關系，與無性孢子數(shù)量成反相關系。

4、當碳源濃度為1%-20%、氮源濃度為0.1%-0.7%、鹽離子為1%-5%、溫度為15℃-28℃、pH為6-7時，冠突散囊菌以有性繁殖為主，幾乎不產生無性孢子，當碳源濃度為20%-90%、氮源濃度為0.7%-11%、鹽離子為5%-15%、溫度為28℃-40℃、pH為3-6和7-9時，冠突散囊菌以無性繁殖為主，無性孢子數(shù)量遠大于有性孢子。
　　2.利用液體發(fā)酵技術對冠突散囊菌產降脂類物質-洛伐他汀進行試驗研究，以洛伐他汀（色譜純）為

5、對照，通過薄層層析和高效液相色譜分析，結果顯示：冠突散囊菌液體發(fā)酵液中含有洛伐他汀，其含量為6.199mg/L。表明冠突散囊菌具有產生洛伐他汀的能力。
　　3.對冠突散囊菌所產黃色素的研究
　　(1)用石油醚對黃色素進行提取、過濾、減壓濃縮和揮發(fā)溶劑后得到黃色素粗品，其得率為1.25%。黃色素抑菌試驗顯示：黃色素對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為(10.57?0.35)mm，對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度小于0.5%；對大腸桿菌

6、的抑菌圈直徑為(0.70?0.31)mm，對大腸桿菌抑菌的最低抑菌濃度大于3%。
　　(2)通過薄層層析對黃色素粗品進行分離純化，結果表明：薄層最佳展開劑為石油醚:丙酮:甲醇(10:1:2)，展開結果為6條色帶，各色帶的Rf值分別為0.84、0.48、0.40、0.38、0.30、0.24；在相同展開劑下對一次展開中黃色素含量最高的兩條色帶進行二次展開，其中Rf為0.40的條帶又被展開為2條色帶，Rf分別為0.64和0.34；Rf

7、為0.38的條帶被展開為3條色帶，Rf分別為0.74、0.45、0.31。
　　(3)對二次分離的5條色帶進行紫外掃描和紅外掃描，紫外掃描結果顯示：5種色素在213nm附近都有吸收峰，Rf為0.64的色素在250-300nm內含有3個吸收峰，其余4種色素在250-300nm內含有2個吸收峰，在300nm以上，除Rf為0.34的色素無吸收峰外其它4種色素都含有吸收峰；紅外結果表明4-1號色素含有官能團O–H、–CH3或–CH2、C=