野生雁鴨IL-2基因的克隆、表達(dá)及其生物活性檢測.pdf

1、野生雁鴨是重要的珍稀禽類，多種雁鴨屬我國的二級保護(hù)動物，也被列入《世界自然保護(hù)聯(lián)盟》國際鳥類紅皮書。野生雁鴨是濕地生態(tài)系統(tǒng)的主要組成部分，是監(jiān)測濕地環(huán)境質(zhì)量變化的生物指標(biāo)，具有重要的生態(tài)價值。雁鴨肉味鮮美，營養(yǎng)豐富，是我國馴養(yǎng)繁殖的一個主要品種，因此野生雁鴨具有較高的經(jīng)濟(jì)價值。近年來的研究表明野生雁鴨可能是禽流感等重要病毒性傳染病的天然宿主，受到獸醫(yī)專家和動物專家的高度重視，因此也具有重要的科學(xué)研究價值。白介素-2(Inerleuki-

2、2)是重要的免疫細(xì)胞因子之一，具有促進(jìn)免疫細(xì)胞存活和增殖、增強(qiáng)免疫應(yīng)答水平，調(diào)節(jié)機(jī)體自身免疫等作用，臨床上被應(yīng)用于增強(qiáng)免疫應(yīng)答水平、建立免疫檢測指標(biāo)、預(yù)防或治療細(xì)菌和病毒感染等領(lǐng)域。為了了解不同雁鴨IL-2基因的分子差異和遺傳變異水平，并嘗試應(yīng)用細(xì)胞因子對圈養(yǎng)野生雁鴨進(jìn)行免疫治療，提高雁鴨對外界環(huán)境的自身免疫水平，我們克隆、表達(dá)了雁鴨IL-2基因，并對其生物學(xué)活性進(jìn)行了初步研究。
　　參照GenBank發(fā)表的番鴨IL-2基因序列，

3、設(shè)計合成了一對特異性引物，以經(jīng)ConA誘導(dǎo)培養(yǎng)的的綠頭鴨、赤麻鴨、斑嘴鴨、鴻雁、白額雁和斑頭雁六種雁鴨外周血淋巴細(xì)胞提取的總RNA為模板，應(yīng)用RT-PCR方法擴(kuò)增得到六種雁鴨的IL-2基因。序列分析表明三種鴨的開放閱讀框長度均為423bp，編碼140個氨基酸。三種雁的開放閱讀框長度均為426bp，編碼141個氨基酸。序列分析表明六種雁鴨的核苷酸序列相對較保守，但在某些位點有堿基的變異，同時引起了相應(yīng)位點編碼的氨基酸的變異。同源性分析表明

4、野生雁鴨與禽類中番鴨和火雞的同源性最高，而與其他種屬的哺乳動物及嚙齒類動物的IL-2基因的核苷酸同源性均低于49.3％。進(jìn)化樹結(jié)果表明野生雁鴨與番鴨的遺傳距離最近。
　　將赤麻鴨IL-2基因的成熟肽序列與表達(dá)載體pET32a(+)連接，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET32a-IL-2，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，在IPTG誘導(dǎo)下IL-2蛋白得到表達(dá)，收集菌液進(jìn)行SDS-PAGE電泳，表達(dá)產(chǎn)物大小約為31.7KDa，與融合蛋白的預(yù)期分子量一致。目的