PEA3對(duì)FAAP基因的調(diào)控.pdf

1、Ets家族能編碼一大類轉(zhuǎn)錄因子。編碼的所有轉(zhuǎn)錄因子都有一個(gè)高度保守的含85個(gè)氨基酸的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，被命名為ETS結(jié)構(gòu)域。它能特異性的識(shí)別并結(jié)合嘌呤豐富的DNA中心靶序列5ˊ-GGA(A/T)-3ˊ。根據(jù)轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域和ETS結(jié)構(gòu)域?qū)⑺械腅ts家族成員分成了四大類，每類包含幾個(gè)亞家族，每個(gè)亞家族又包含不同的成員。PEA3亞家族就屬于Ets家族，它包含三個(gè)家族成員：ER81/ETV1、PEA3/ETV4、ERM/ETV5。P

2、EA3亞家族的三個(gè)成員ETV1、ETV4、ETV5在Ets結(jié)構(gòu)域的同源性高達(dá)95％，在轉(zhuǎn)錄激活域的同源性高達(dá)85％。
　　粘著斑相關(guān)蛋白（FAAP，focal adhesion associated protein）是由小鼠D10Wsu52e基因編碼的。此蛋白約55KD，含505個(gè)氨基酸。FAAP存在于許多物種中且高度保守。在細(xì)菌和人中已鑒定出它的同源物分別為 RtcB和HSPC117。已有研究證明，RtcB是一種獨(dú)特的依賴GTP

3、的RNA連接酶和DNA連接酶。而HSPC117是人類tRNA連接酶復(fù)合體的必需亞單位。
　　通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)FAAP啟動(dòng)子上含有8個(gè)PEA3結(jié)合位點(diǎn)?？寺×薖EA3家族的三個(gè)成員ER81/ETV1、PEA3/ETV4、ERM/ETV5，以及3個(gè)熒光素酶報(bào)告基因 pGL2-492，pGL2-336，pGL2-276。pGL2-492含有全部的8個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，pGL2-336含有4個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，pGL2-276只含有1個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。同

4、時(shí)將PEA3結(jié)合位點(diǎn)的核心序列 AGGA突變成 ATTT,克隆突變體 pGL2-m492、pGL2-m336、pGL2-m276。通過(guò)雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ETV1、ETV4、ETV5都對(duì)pGL2-1317具有活性影響，且ETV4對(duì)pGL2-492、pGL2-336和pGL2-276也具有活性影響。最后，通過(guò)凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了PEA3與小鼠FAAP啟動(dòng)子具有一定的結(jié)合作用。
　　總之，我們的研究表明PEA3能通過(guò)結(jié)合FAAP啟動(dòng)子結(jié)