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文檔簡介
1、蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis，簡稱Bt）是目前研究最深入的殺蟲微生物，其殺蟲蛋白基因也是應(yīng)用最廣泛和最有發(fā)展?jié)摿Φ目瓜x基因，因此，深入發(fā)掘Bt新菌株、分離克隆新型的殺蟲基因?qū)οx的防治具有重要意義。近年來，鞘翅目害蟲尤其是金龜甲科害蟲的危害日趨嚴(yán)重，由于其幼蟲（俗稱蠐螬）生活在土壤中，給防治帶來很大的困難，本研究從本實(shí)驗(yàn)室保存的菌株中篩選高毒力野生菌株，并從中分離克隆對金龜甲科害蟲有效的新型殺蟲蛋白基因，
2、研究該基因的表達(dá)和殺蟲活性，為構(gòu)建高效廣譜的Bt工程菌和培育轉(zhuǎn)基因抗蟲植物提供新型基因資源。本研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下:
以本實(shí)驗(yàn)室分離的Bt菌株B-DLL質(zhì)粒DNA為模板，利用特異性引物JJX5和JJX3擴(kuò)增出3.5kb大小的片段，將該片段插入克隆載體pMD18-T中，篩選獲得一個含新基因的克隆pMD18-cry8new。序列測定表明，該基因編碼區(qū)為3525bps，編碼的蛋白質(zhì)由1174個氨基酸殘基組成，理論分子量為13
3、3.05kD，等電點(diǎn)為pH4.69，為弱酸性蛋白。該基因核苷酸序列已在GenBank登錄(Accessionnumber:HQ174208)，編碼的氨基酸序列與Cry8Fa1的同源性最高達(dá)99.8％,被國際Btδ-內(nèi)毒素命名委員會正式命名為Cry8Fa2。將cry8Fa2基因插入Bt表達(dá)載體pSXY422b中，電擊導(dǎo)入Bt無晶體突變株HD-73-中，獲得重組Bt工程菌HD73-Cry8Fa2，該工程菌能形成方形的伴孢晶體，并表達(dá)130k
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