MicroRNA-4284在下肢動脈硬化閉塞癥中的表達特點和意義分析.pdf

1、目的：探討微小RNA-4284（MicroRNA-4284簡稱miR-4284)在下肢動脈硬化閉塞癥（Arteriosclerosis obliterans,ASO）患者血漿和病變血管中的表達量變化特點；探討在缺血清缺氧狀態(tài)下miR-4284在動脈平滑肌細胞增殖、遷移及凋亡中的作用。
　　方法：臨床試驗：收集西南醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血管甲狀腺外科2014-2015年間收治的55例下肢ASO患者和54例健康對照者血漿，24例下肢AS

2、O截肢患者的病變血管及24例外傷截肢患者正常血管。選取其中3對年齡及性別相近的下肢ASO患者和正常健康人血漿用microarray篩選出下肢ASO患者血漿與正常健康人血漿中相比較表達差異在2倍以上的24種MicroRNAs(miRNAs)，用實時熒光定量PCR檢測臨床55例下肢ASO患者和54例健康對照人群血漿中miR-4284的表達量，24例下肢ASO截肢患者病變血管和24例正常血管中miR-4284的表達量；按Fontaine分期將

3、55例下肢ASO患者分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，用RT-qPCR分別檢測各期患者血漿中miR-4284的表達量。細胞實驗：正常培養(yǎng)主動脈平滑肌、臍靜脈內(nèi)皮細胞后，再進行缺血清缺氧處理用以模擬臨床ASO患者下肢缺血缺氧的狀態(tài)。用高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)皮細胞再進行缺血清缺氧處理，用以模擬臨床ASO合并Ⅱ型糖尿病患者。采用RT-qPCR檢測各組細胞中miR-4284的相對表達量；分別上調(diào)、下調(diào)miR-4284后通過cck8檢測細胞增殖、transw

4、ell檢測細胞遷移，流式檢測細胞凋亡，蛋白印跡檢測凋亡相關(guān)蛋白XIAP、BCL2、BAX的表達。
　　結(jié)果：臨床試驗顯示，與健康對照組相比下肢ASO患者血漿中miR-4284的表達量在Fontaine第Ⅰ期中就開始顯著升高，并在第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期血漿中一直持續(xù)在高水平狀態(tài)；下肢ASO患者病變血管與正常血管相比，病變血管中miR-4284的表達量也明顯升高；細胞試驗：臍靜脈內(nèi)皮細胞在低糖及高糖缺血清缺氧的條件下miR-4284的表達量均

5、升高；主動脈平滑肌細胞在缺血清缺氧的條件下miR-4284表達量降低；主動脈平滑肌細胞在缺血清缺氧的條件下，上調(diào)、下調(diào)miR-4284，對細胞的增殖、遷移沒有太大影響；在不進行缺血清缺氧處理的主動脈平滑肌細胞中，上調(diào)、下調(diào)miR-4284對細胞凋亡沒有太大影響；在缺血清缺氧的主動脈平滑肌細胞中上調(diào)miR-4284的表達對細胞的凋亡沒有太大影響，但下調(diào)miR-4284的表達能抑制主動脈平滑肌細胞凋亡；抑制凋亡相關(guān)蛋白XIAP、BCL2在下

6、調(diào)miR-4284后表達量明顯升高，促凋亡相關(guān)蛋白BAX在下調(diào)miR-4284后表達量明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：miR-4284在下肢ASO患者血漿和血管組織中表達量明顯升高；缺血清缺氧誘導(dǎo)主動脈平滑肌細胞中miR-4284表達明顯降低，缺血清缺氧誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞中miR-4284表達明顯升高；miR-4284對平滑肌細胞增殖、遷移作用不大；下調(diào)miR-4284可以抑制平滑肌細胞凋亡，調(diào)控miR-4284有望成為