經胃自然腔道內鏡手術(TG-NOTES)預防感染的基礎研究.pdf

1、本文對經胃自然腔道內鏡手術（TG--NOTES）預防感染進行了基礎研究
　　第一部分 人體胃液菌群分析
　　目的:研究表明人體胃腔內存在很多通過適應了胃內環(huán)境而得以長期存在的細菌，而胃腔內菌群的變化則與人體的某些消化系統(tǒng)疾病息息相關。本研究采用傳統(tǒng)實驗室培養(yǎng)法和細菌的16 s-rDNA檢測的兩種方法明確胃液內菌群的種類，確定有無致病菌，為后期TG-NOTES預防感染的研究奠定基礎。
　　方法:本研究采用臨床試驗的方法，

2、提取2015年3月至2015年6月在長海醫(yī)院消化內鏡中心行常規(guī)胃鏡檢查診斷為淺表性胃炎40例患者胃腔內胃液，采用兩種方法行細菌檢測，一種送往本院細菌檢測室(20例)，進行細菌菌落數(shù)觀察及菌種鑒定。另外一種由上海瑞翌生物有限公司通過測定細菌16s-rDNA方式代為檢測(20例)。
　　結果:我院細菌檢測室培養(yǎng)出的細菌以革蘭陽性菌、革蘭陰性菌和真菌為主，包括:金黃色葡萄球菌、微黃奈瑟菌、粘滑羅氏菌、口腔/緩癥鏈、芽孢桿菌、白色念珠菌等

3、。16s-rDNA檢測結果表明胃腔內的細菌前20種主要的細菌含量由多到少包括:普雷沃菌屬(Prevotella)、Helicobacter(Hp)、奈瑟菌屬(Neisseria)、嗜血桿菌屬（Haemophilus）、韋榮氏球菌屬(Veillonella)、梭桿菌屬(Fusobacterium)、卟啉菌屬(Porphyromonas)、鏈球菌屬（Streptococcus）、Saccharibacteria_genera_incerta

4、e_sedis、擬普雷沃菌屬(Alloprevotella)、纖毛菌屬(Leptotrichia)、碳酸噬胞菌屬(Capnocytophaga)、嗜酸乳桿菌屬（SR1_genera_incertae_sedis）、顆粒鏈菌屬(Granulicatella)、彎曲菌屬(Campylobacter)羅氏菌屬(Rothia)、回線屬(Treponema)、消化鏈球菌屬(Peptostreptococcus)、桿菌屬(Aggregatibact

5、er)、放線菌屬(Actinomyces)。
　　結論:傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)法和16s-rDNA方法均提示胃腔內為有菌環(huán)境，且細菌種類較多，其中不乏致病菌。可見經胃自然腔道內鏡手術(TG-NOTES)局部胃腔消毒具有明確的必要性。
　　第二部分 局部灌洗消毒劑對大鼠急性毒性觀察
　　目的:前期研究發(fā)現(xiàn)胃腔為有菌環(huán)境，局部灌洗消毒預防TG-NOTES手術感染具有確切效果，目前報道應用較多且消毒效果和安全性均較確切的局部粘膜消毒劑

6、主要是洗必泰和聚維酮碘，然而目前尚無洗必泰和聚維酮碘應用于人體胃腔消毒的相關報道。本階段研究目的為通過動物實驗明確胃腔內局部灌洗洗必泰或聚維酮碘對SD大鼠有無急性毒性作用，為下一步應用于臨床研究奠定基礎。
　　方法:本研究采用動物實驗的方法，通過予SD大鼠經口分別灌注洗必泰、聚維酮碘以及生理鹽水（20ml/kg），觀察大鼠一般情況，胃粘膜及肝腎組織病理切片，以及血液指標（血常規(guī)、肝腎功能等），明確局部灌洗消毒劑對大鼠急性毒性反應。

7、
　　結果:口服給藥1h，24h，48h，7天，14天后，大鼠未見死亡。觀察大鼠一般情況，其行為活動、外觀體征、呼吸、糞便性狀及給藥局部胃黏膜均未見明顯異常。灌洗大鼠血液學指標檢測結果表明，灌洗組大鼠無論雌性還是雄性其血常規(guī)指標及生化指標與對照組比較三組間差異均無統(tǒng)計學意義(p＞0.05）。肝腎組織病理切片提示肝腎組織均無明顯組織和結構破壞。灌洗后胃粘膜各層次結構完整，未見明顯出血點及炎性滲出。
　　結論:胃腔灌洗洗必泰或聚

8、維酮碘對大鼠無急性毒性作用。
　　第三部分 洗必泰和聚維酮碘灌洗胃腔預防經胃自然腔道內鏡手術(TG-NOTES)感染的臨床研究
　　目的:前期研究表明胃腔為有菌環(huán)境，存在灌洗消毒的必要性，同時動物實驗證實局部灌洗洗必泰和聚維酮碘對SD大鼠無急性毒性作用。本部分研究的目的是通過臨床試驗明確人體胃腔內局部灌洗洗必泰和聚維酮碘前后胃腔菌群的變化情況，明確TG-NOTES手術中局部胃腔灌洗洗必泰和聚維酮碘是否可以預防感染，同時比對兩

9、種消毒劑的消毒效果，明確效果最佳的消毒劑。
　　方法:本研究采用臨床試驗的方法，以2015年3月至2015年6月在長海醫(yī)院消化內科常規(guī)行胃鏡檢查診斷為淺表性胃炎的40例病人，聚維酮碘灌洗組20例，洗必泰灌洗組20例，患者取側臥位，常規(guī)靜脈麻醉后，應用Olympus GIF-260滅菌胃鏡常規(guī)進鏡至胃腔，留取胃腔內消化液20ml（標本A）;吸除胃腔內殘存液體，然后分別使用洗必泰溶液、聚維酮碘各300ml噴灑灌洗，維持5min后，再用

10、無菌生理鹽水100ml沖洗胃腔，留取沖洗液20ml(標本B、標本C)。標本送檢細菌培養(yǎng)及鑒定。術后24h觀察患者有無腹痛、惡心、嘔吐等消化道不適癥狀。
　　結果:所有患者均順利完成常規(guī)胃鏡檢查術。我院細菌檢測方法無論是聚維酮碘組還是洗必泰組灌洗消毒后均未檢測到細菌，16s-rDNA檢測方法結果表明洗必泰和聚維酮碘灌洗后，細菌種類和豐度較灌洗前明顯降低。顯著性差異方面:消毒后胃腔內致病菌種類較消毒前明顯減少，兩種消毒劑組間差異性分析

11、未見OTU水平的差異，未找到屬水平差異，也未找到所有水平差異。洗必泰組患者無任何不適，聚維酮碘組(3/20)出現(xiàn)2例惡心及1例嘔吐，未予治療后自行緩解。兩組間比較差異無統(tǒng)計學意義，兩種消毒劑副作用情況無差異。
　　結論:TG-NOTES術前使用洗必泰或聚維酮碘溶液灌洗胃腔預防感染效果確切，灌洗后胃腔內細菌明顯減少，基本達到無菌狀態(tài)。此外，兩種消毒劑安全有效，副作用小。
　　第四部分 新型縫合夾和傳統(tǒng)閉合夾在經胃自然腔道內鏡手

12、術(TG-NOTES)切口閉合療效的對比研究
　　目的:胃壁切口閉合的質量是影響TG-NOTES術后感染的重要因素，目前應用于NOTES手術切口閉合有多種方法，效果不一。本研究擬采用動物試驗的方法，對比現(xiàn)有的單純金屬閉合夾和新型縫合夾的閉合效果。
　　方法:12只雌性實驗豬，常規(guī)胃竇部位黏膜全層切除，創(chuàng)面穿透至腹腔模擬TG-NOTES，病灶切除范圍直徑3-5cm，6例應用金屬夾夾閉，6例應用新型縫合夾，對比評估夾閉時間、夾子

13、數(shù)量、實驗動物的存活情況、術前術后胃腔細菌菌落計數(shù)、術后血常規(guī)白細胞及術后體溫波動情況。
　　結果:常規(guī)黏膜全層切除術后，縫合夾組夾閉時間平均為8.54min;夾子數(shù)量平均4.16個;普通金屬夾組夾閉時間平均為10.73 min，夾子數(shù)量平均8.66個，普通金屬夾組出現(xiàn)1例死亡，余全部存活。兩組術后血常規(guī)白細胞及體溫情況差異無統(tǒng)計學意義。兩種消毒劑灌洗后術前術后菌落計數(shù)有明顯統(tǒng)計學意義。
　　結論:新型縫合夾無論是在夾閉時間