Tie2信號系統(tǒng)激活對血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景:微血管內(nèi)皮損傷是急性腎損傷和慢性腎臟疾病共同的病理改變,貫穿于它們的發(fā)生、發(fā)展過程。與腎小管上皮細(xì)胞相比,腎微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺乏有效的再生能力,當(dāng)腎功能恢復(fù)到正常水平以后,腎周微血管密度的降低或丟失的病變?nèi)詫㈤L期存在,最終將導(dǎo)致慢性腎小管間質(zhì)纖維化。Tie2信號系統(tǒng)被認(rèn)為在血管內(nèi)皮的保護(hù)方面起著重要的作用,研究中該信號系統(tǒng)的激活多應(yīng)用Ang-1,但也有研究顯示Ang-1促進(jìn)急性腎損傷,炎癥細(xì)胞浸潤,后期促進(jìn)腎纖維化。因而我們集中

2、研究 Tie2信號對血管內(nèi)皮的保護(hù)作用。
  目的:本研究建立脂多糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,探討Tie2信號系統(tǒng)激活對血管內(nèi)皮細(xì)胞是否具有保護(hù)作用。為后期進(jìn)一步研究提供依據(jù)。
  方法:第一部分離體培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC,以4×104接種于96孔板,200ul/孔。分別以濃度0ug/ml,0.125 ug/ml,0.25 ug/ml,0.5 ug/ml,1 ug/ml,2 ug/ml,5 ug/ml,10 ug/

3、ml的LPS刺激損傷細(xì)胞。孵育24小時(shí),采用cck8法測定細(xì)胞活性。根據(jù)結(jié)果選擇適宜的LPS濃度,建立細(xì)胞損傷模型。第二部分根據(jù)第一部分結(jié)果選擇LPS刺激濃度為10 ug/ml。細(xì)胞分為三組:正常對照組;LPS組;LPS+Tie2單抗組。應(yīng)用Elisa技術(shù)檢測孵育24小時(shí)后各組細(xì)胞上清sVCAM-1的表達(dá)水平。應(yīng)用PCR技術(shù)檢測孵育6h后各組細(xì)胞VCAM-1 mRNA的水平變化。應(yīng)用PCR技術(shù)檢測孵育6h后各組細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bax、B

4、cl-2的水平變化。應(yīng)用WESTERN BLOT技術(shù)檢測孵育24、48小時(shí)后,各組細(xì)胞α-SMA的表達(dá)水平的變化。
  結(jié)果:第一部分 cck8結(jié)果顯示,內(nèi)皮細(xì)胞被不同濃度LPS損傷刺激后,各濃度LPS均對細(xì)胞增殖活性產(chǎn)生抑制作用,與正常細(xì)胞比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
  第二部分采用10 ug/ml LPS刺激損傷細(xì)胞后,LPS組細(xì)胞上清sVCAM-1分泌量與VCAM-1 mRNA較空白對照組明顯升高(P<0.

5、05)。加入Tie2激發(fā)單抗后水平下降(P<0.05)。孵育6h后,LPS組細(xì)胞BaxmRNA與BaxmRNA/Bcl-2mRNA較空白對照組明顯升高(P<0.05)。加入 Tie2激發(fā)單抗后水平下降(P<0.05)。各組 Bcl-2基因水平無明顯差異(P>0.05)。孵育24h及48h后,LPS組細(xì)胞α-SMA水平較空白對照組明顯升高(P<0.05)。加入Tie2激發(fā)單抗后水平下降(P<0.05)。
  結(jié)論:1.LPS可引起血

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