四肢長骨骨折對顱腦創(chuàng)傷繼發(fā)性腦損傷的影響及高遷移率族蛋白B1在其中的作用.pdf

1、目的：在全世界范圍內，顱腦創(chuàng)傷（TBI）已經成為中青年人群致死、致殘的首要因素。TBI病理過程主要包括原發(fā)顱腦損傷和繼發(fā)性顱腦損傷，原發(fā)性的顱腦損傷往往發(fā)生在受傷當時，由機械暴力直接導致，而繼發(fā)性損傷則是出現在原發(fā)性損傷之后的一系列細胞及生化級聯反應，包括炎性反應、自由基損傷、興奮性毒性、水腫、鈣超載、線粒體損傷等一系列病理過程，并導致腦水腫、細胞功能障礙、顱內壓增高、腦內調節(jié)機制的破壞等，并最終加重腦部損傷，預后變差。研究發(fā)現，高遷移

2、率族蛋白B1（HMGB1）作為促炎癥反應介質，在繼發(fā)性損傷的炎癥反應中具有潛在的中心作用。
　　在臨床工作中，顱腦創(chuàng)傷合并肢體骨折（BF）是常見的TBI復合傷類型，并且這類患者往往比單純TBI患者病情更重，預后更差。而在BF對于TBI患者神經功能恢復的影響，以及HMGB1在其中的作用方面的研究尚屬空白。因此，本次研究旨在探討合并肢體骨折對TBI小鼠及患者神經功能恢復及預后的影響，以及血清中HMGB1在這一過程中所扮演的角色。

3、>　　方法：
　　1.動物實驗：將192只雄性C57BL/6小鼠（12~14周齡、28~32 g）分成對照組、單純TBI組、TBI+BF組、TBI+BF+HMGB1抗體組四組，每組48只。模型制作完成后，均立即抽取小鼠靜脈血，靜置離心后獲取血清標本并置于-80℃冰箱保存待測。小鼠正常飼養(yǎng)。在飼養(yǎng)2天后，從各組小鼠中隨機挑選8只小鼠，抽取靜脈血并獲取血清標本，置于-80℃冰箱保存待測，抽血完成后放回各自籠中，同樣的方法再次從各組中隨

4、機挑選8只小鼠進行神經功能缺損評分（NSS）、粘附物去除實驗（Adhesive removal test）、轉角實驗（Corner test）等測試，記錄測試結果后放回原飼養(yǎng)籠。再從各組中隨機挑選24只小鼠，其中，8只進行腦含水量測試，8只利用實時熒光定量PCR（RT-PCR）技術檢測腦損傷部位炎癥因子基因的表達水平，剩下8只測定損傷壞死腦組織體積。在飼養(yǎng)第4天，采用與第2天同樣的方法，對四組小鼠留取靜脈血清標本，并進行各項測試和檢驗。

5、小鼠血液標本收集完畢后，采用酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）測試血清標本內HMGB1含量。
　　2.臨床實驗:根據實驗納入標準將41位急性TBI重癥患者納入研究，并分為2組：單純TBI組和TBI+BF組，記錄患者入院時GCS評分，并在受傷第1天、第3天、第5天、第7天進行血液HMGB1的檢測。正常對照組標本來自于體檢中心體檢人群中身體健康體檢者10名。所有患者隨訪6個月，并記錄傷后第6個月時的GOS評分。
　　結果：

6、　　1.TBI組與TBI+BF組小鼠在第2天、第4天的NSS評分、粘附物去除試驗去除時間均比對照組要大，轉角試驗左轉的頻率均明顯高于對照組小鼠。而與TBI組相比，TBI+BF組小鼠NSS評分在第2天無明顯差異，第4天時TBI+BF組評分明顯高于單純TBI組；TBI+BF組小鼠在第2天、第4天的粘附物去除試驗去除時間均比TBI組長。TBI+BF組小鼠轉角試驗左轉的頻率在第2天時與TBI組無明顯差異，而在第4天時明顯高于TBI組。
　

7、　2.小鼠損傷腦組織的體積占比：在第2天和第4天，TBI組和TBI+BF組明顯比對照組要大。TBI組和TBI+BF組相比，兩組第2天沒有明顯區(qū)別，但是在第4天，TBI+BF組小鼠比單純TBI組要大。小鼠腦組織含水量：TBI組與TBI+BF組在第2天和第4天均高于對照組，TBI組和TBI+BF組在第2天沒有明顯差異，但在第4天TBI+BF組比TBI組的含水量要高。
　　3.在傷后第2天、第4天，TBI和TBI+BF組的TNF-α,

8、IL-1β和IL-6的mRNA表達水平均比對照組要高。TBI組和TBI+BF組在第2天TNF-α和IL-1β的mRNA表達水平沒有明顯差異，而TBI+BF組小鼠IL-6 mRNA表達水平則高于單純TBI組小鼠。在第4天， TBI+BF組小鼠這三種因子的mRNA表達水平全部明顯高于TBI組小鼠。
　　4.小鼠血清HMGB1含量：三組在受傷當日測得含量均較低，且無明顯差別；在受傷第2天TBI和TBI+BF組含量明顯增高，均高于空白對照

9、組，且TBI+BF組含量比單純TBI組高；受傷第4天時，TBI+BF組小鼠比單純TBI組小鼠含量更高；TBI組小鼠血清HMGB1含量在TBI后2天之后保持穩(wěn)定，而TBI+BF組小鼠HMGB1水平持續(xù)升高，并且明顯高于TBI組。
　　5.與TBI+BF組小鼠相比，TBI+BF+HMGB1抗體組小鼠第2天及第4天損傷腦組織體積占比、腦組織水含量、NSS評分、轉角試驗左轉的頻率均比TBI+BF組低。提示HMGB1抗體減輕了腦損傷的程度。

10、
　　6.在臨床實驗中，單純TBI組患者與TBI+BF組患者在入院時GCS評分無明顯差異，實驗組各時間段測得的血清HMGB1含量均高于正常對照組。單純TBI組與TBI+BF組相比較，第一天兩組HMGB1含量無統計學差異，而第3天、第5天、第7天測得TBI+BF組HMGB1含量均大于單純TBI組，提示TBI+BF組的血清HMGB1組增長速度比單純TBI組要快。
　　7.單純TBI組比TBI+BF組傷后第6個月GOS評分高，患者