PTEN在硫代乙酰胺誘導(dǎo)的比格犬肝纖維化中的表達(dá)變化及意義.pdf

1、研究背景：
　　肝纖維化（hepatic fibrosis，HF）是各種致病因子作用于肝臟致其發(fā)生慢性損傷-修復(fù)的動態(tài)過程，其病理生理過程涉及分子水平、細(xì)胞水平及細(xì)胞外環(huán)境等多個層次，發(fā)生機(jī)制極其復(fù)雜，其中以肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）的激活最為關(guān)鍵?；罨腍SC表達(dá)α-平滑肌肌動蛋白（alpha-smooth muscle actin，α-SMA）同時分泌大量以Ⅰ型膠原（CollagenⅠ）蛋

2、白為主的細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM），ECM合成與降解失衡導(dǎo)致大量ECM沉積在肝臟，最終發(fā)展為肝纖維化。近年來研究發(fā)現(xiàn)肝纖維化，甚至早期肝硬化是可逆轉(zhuǎn)的。
　　第10號染色體丟失與張力蛋白同源的磷酸酶基因（ phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）是人類最早發(fā)現(xiàn)的一個具有蛋白磷酸酶和脂質(zhì)磷酸酶雙重活性的腫瘤抑制基因

3、。近年來有研究表明，在纖維化疾病中PTEN也發(fā)揮重要作用。導(dǎo)師課題組長期致力于肝纖維化機(jī)制的研究，前期研究已證實(shí)PTEN在小動物大鼠纖維化肝組織中發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用，那么PTEN是否參與大動物比格犬肝纖維化的發(fā)生呢？目前尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本課題設(shè)計(jì)以大動物比格犬為研究對象，通過皮下注射硫代乙酰胺（thioacetamide，TAA）構(gòu)建肝纖維化模型，觀察肝組織中α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、Ⅰ型膠原（CollagenⅠ）、PTEN

4、蛋白的表達(dá)情況。
　　目的：
　　通過觀察PTEN在TAA誘導(dǎo)的比格犬纖維化肝組織中的表達(dá)變化，探討PTEN是否參與大動物肝纖維化的發(fā)生。
　　方法：
　　12只健康清潔雄性比格犬，8月齡，體重（10±1）kg，隨機(jī)分為2組，每組6只。正常對照組：正常飼養(yǎng)12周，不做特殊處理；TAA模型組：皮下注射TAA，12mg/kg，2次/周，持續(xù)12周。全部比格犬于12周末禁食后行1.5％戊巴比妥鈉靜脈麻醉，取肝左葉進(jìn)行1

5、0％中性甲醛固定，常規(guī)梯度酒精脫水、石蠟包埋并切片。行HE染色和Masson染色觀察肝組織病理形態(tài)改變及膠原纖維形成情況。用免疫組織化學(xué)染色檢測比格犬肝組織中α-SMA、CollagenⅠ、PTEN蛋白的表達(dá)和分布。
　　結(jié)果：
　?。?）HE染色和Masson三色染色結(jié)果顯示：正常對照組比格犬肝組織中肝細(xì)胞飽滿，細(xì)胞條索排列規(guī)整，肝小葉結(jié)構(gòu)正常；TAA模型組大部分肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松呈空泡狀，部分肝細(xì)胞壞死，并伴有大量炎性細(xì)胞浸

6、潤，結(jié)締組織增生形成纖維間隔，導(dǎo)致正常的肝小葉結(jié)構(gòu)遭到破壞。
　?。?）Masson三色染色圖像分析結(jié)果顯示：與正常對照組相比，TAA模型組肝組織膠原含量明顯增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（6.47%±1.32%vs1.23%±0.21%，P<0.01）。
　?。?）免疫組織化學(xué)染色顯示：①α-SMA在正常對照組肝組織中僅少量表達(dá)于血管壁，染色較淡，呈淺黃色；而在TAA模型組肝組織中，α-SMA主要在門靜脈、匯管區(qū)、纖維間隔處表達(dá)，呈棕

7、黃色。②CollagenⅠ在正常對照組肝組織中分布于中央靜脈壁，匯管區(qū)的血管壁、膽管壁，少量見于肝竇，呈絲狀淺黃色；在TAA模型組肝組織中CollagenⅠ明顯增多，主要表達(dá)于匯管區(qū)周圍、纖維間隔區(qū)和少量肝竇，顏色加深，呈棕黃色顆粒。③PTEN在正常對照組比格犬肝組織中表達(dá)廣泛，主要在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，少量存在于胞核中；而在TAA模型組肝組織中PTEN表達(dá)減少，主要分布于纖維間隔、匯管區(qū)和增生的膽管周圍細(xì)胞處。
　?。?）免疫組織化學(xué)染

8、色圖像分析結(jié)果顯示：與正常對照組相比，TAA模型組肝組織中CollagenⅠ和α-SMA表達(dá)均明顯增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（CollagenⅠ：2.11±0.51 vs0.12±0.03，P<0.01；α-SMA：2.35±0.65 vs0.32±0.13，P<0.01）；PTEN的表達(dá)顯著降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（5.16±0.73 vs0.30±0.07，P<0.01）。
　　（5）α-SMA與CollagenⅠ、PTEN相關(guān)性分析表明：