急性低氧肺損傷發(fā)病機(jī)制網(wǎng)絡(luò)通路解析.pdf

1、目的：
　　建立急性低氧肺損傷大鼠模型，探討SD大鼠在模擬高原低氧急性肺損傷過(guò)程中NALP3炎性體信號(hào)通路及相關(guān)因子AQP-1、AQP-4的變化，闡明AQP-1、AQP-4、IL-1β、NALP3在急性低氧肺損傷發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：
　　將60只健康SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、高原低氧1d組、2d組、3d組、5d組、7d組。對(duì)照組大鼠在蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院取材，將實(shí)驗(yàn)組大鼠置于低壓氧艙，模擬海拔5000 m高度（氧濃度

2、：14.16％）。分別于1d、2d、3d、5d、7d后各選取1組10只，稱(chēng)重后用2.5%戊巴比妥麻醉（0.2ml/100g）。打開(kāi)腹腔，抽取腹主動(dòng)脈血，血?dú)夥治鰞x檢測(cè)各組大鼠動(dòng)脈血?dú)?；抽取下腔靜脈靜脈血，Elisa法檢測(cè)各組大鼠血清IL-1β水平；打開(kāi)胸腔，取大鼠右肺中葉組織，分別用于以下檢測(cè)：用電子天平稱(chēng)量肺組織濕干重，并計(jì)算濕/干比值；顯微鏡下觀察肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化并用Smith評(píng)分法對(duì)實(shí)驗(yàn)各組肺組織進(jìn)行病理評(píng)分；透射電鏡下觀察肺組

3、織超微結(jié)構(gòu)的變化；免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)肺組織NALP3、caspase-1、IL-1β蛋白表達(dá)與分布并進(jìn)行半定量分析；Western-blot方法和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各組大鼠AQP-1、AQP-4的蛋白表達(dá)及分布。
　　結(jié)果：
　　1.血?dú)夥治鼋Y(jié)果：與對(duì)照組比較，低氧1d、2d、3d、5d、7d組pH、PaO2下降（P<0.05），PaCO2上升（P<0.05）；3d組pH、PaO2最低，PaCO2最高，（P<0.05）。

4、
　　2.肺組織濕重/干重（W/D）比值：與對(duì)照組肺組織比較，低氧1d、2d、3d、5d、7d組W/D升高，3d組最高；低氧組與對(duì)照組比較，3d組與1d、2d、5d、7d組比較（P<0.05）。
　　3.光鏡下觀察：與正常組相比，低氧組肺組織出現(xiàn)肺泡壁增厚，毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，大量炎性細(xì)胞和紅細(xì)胞滲出等ALI的病理改變。肺組織病理評(píng)分低氧各組均高于對(duì)照組（P<0.05），3d組最高（P<0.05）。
　　4.超微結(jié)構(gòu)觀察

5、：與正常組相比，低氧組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞內(nèi)有空泡，肺泡腔內(nèi)較多巨噬細(xì)胞。
　　5.免疫組化結(jié)果：低氧各組大鼠NALP3、caspase-1、IL-1β的表達(dá)均高于對(duì)照組，3d達(dá)到高峰，之后下降（P<0.05）。
　　6.Western-blot和免疫組化結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，低氧各組大鼠肺組織中AQP-1蛋白表達(dá)量均下降，3d組最低（P<0.05），之后上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AQP4在各組的表達(dá)未見(jiàn)明顯變化（P>0.05

6、）。
　　7.Elisa結(jié)果：低氧各組血清IL-1β水平高于對(duì)照組(P<0.05)，3d組最高(P<0.05)。
　　8.相關(guān)性分析：NALP3、caspase-1、IL-1β的半定量結(jié)果與肺損傷程度呈正相關(guān)（r=0.88，p=0.01；r=0.90， p=0.01；r=0.84，p=0.01）；AQP-1與肺損傷程度呈負(fù)相關(guān)（r=﹣0.80，p=0.01）；AQP-1與IL-1β呈負(fù)相關(guān)（r=﹣0.77，p=0.01）。<

7、br>　　結(jié)論：
　　1.低壓氧艙模擬5000米海拔（氧濃度：14.16%，溫度：21-24℃，濕度：50%）1d即可造成大鼠急性肺損傷，至3d時(shí)變化最為明顯。
　　2.低氧引起的急性肺損傷形成過(guò)程中，NALP3表達(dá)增加，caspase-1活化，促使IL-1β的表達(dá)增加，導(dǎo)致AQP-1表達(dá)降低，造成水的轉(zhuǎn)運(yùn)障礙，使肺內(nèi)含水量增多。因此，NALP3-Caspase-1-IL-1β信號(hào)通路及AQP-1可能參與了低氧引起的急性肺損