骨髓間充質(zhì)干細胞通過抑制多種細胞死亡方式保護體外腦缺血模型的神經(jīng)元.pdf

1、缺血性卒中是世界上引起人類死亡和導致長期殘疾的主要原因之一。然而，目前世界上治療缺血性卒中特別是促進缺失的神經(jīng)功能重建的方法十分有限。目前，建立卒中單元和用重組組織型纖溶酶原激活物(recombinant tissue plasminogen activator，r-tPA)進行靜脈溶栓治療目前已被公認可以改善缺血性卒中的預后，但是由于其狹窄的治療時間窗的限制，使得只有一小部分病人能從中獲益。功能康復治療能使卒中患者缺失的神經(jīng)功能得到一

2、定程度上的恢復，但是，康復治療的效果目前仍不是很樂觀。因此，研究者們正在努力探索降低缺血性卒中的死亡率和促進神經(jīng)功能重建的新方法。目前干細胞移植成為治療卒中的新方法。已有報道骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)對缺血性卒中的神經(jīng)保護作用與其抑制神經(jīng)細胞凋亡有關。但是，骨髓MSCs對其他參與卒中發(fā)病的細胞死亡方式，如parthanatos、壞死性凋亡和自噬的作用如何目前尚不清楚。
　　目的:探討

3、骨髓MSCs通過抑制哪些細胞死亡方式保護體外腦缺血模型的神經(jīng)元。
　　方法:應用全骨髓細胞培養(yǎng)和差速貼壁法純化培養(yǎng)大鼠骨髓MSCs。對原代培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元通過氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation，OGD)和N-甲基-D-天門冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)損傷的方法建立體外腦缺血的模型。應用具有0.4μm小孔的聚碳酸酯膜作為隔層的六孔板建立跨室共培養(yǎng)系統(tǒng)，通過骨髓MSCs-腦缺

4、血的神經(jīng)元共培養(yǎng)的方法建立骨髓MSCs移植治療缺血性卒中的體外模型。用2-溴化丙啶(propidium iodide，PI)/Hoechst33342染色的方法測定神經(jīng)元的死亡率，并對MSCs與各種選擇性抑制細胞死亡的化學抑制劑的神經(jīng)保護作用進行比較。通過免疫熒光染色、蛋白印跡分析和熒光實時定量PCR的方法測定與骨髓MSCs共培養(yǎng)后缺血的神經(jīng)元的parthanatos死亡方式標志物細胞核凋亡誘導因子(apoptosis-inducing

5、 factor，AIF)和多聚二磷酸腺苷核糖(Poly ADP-ribose，PAR)、壞死性凋亡的標志物受體相互作用蛋白1(receptor interacting protein1，RIP1)和受體相互作用蛋白3(receptor interacting protein3，RIP3)、細胞凋亡的標志物cleaved caspase-3以及自噬的標志物Beclin1/輕鏈3-B(light chain3-B，LC3B)表達的變化。

6、r>　　結(jié)果:與骨髓MSCs共培養(yǎng)可以使OGD引起的神經(jīng)元死亡減少約73％～75％和使NMDA損傷引起的神經(jīng)元死亡下降約68％，其神經(jīng)保護作用優(yōu)于任何一種選擇性抑制細胞死亡的化學抑制劑。免疫熒光染色和蛋白印跡分析的結(jié)果表明，MSCs共培養(yǎng)通過減少AIF的入核而抑制parthanatos;通過下調(diào)RIP1/RIP3的表達而減少壞死性凋亡;通過降低cleaved caspase-3的表達而抑制細胞凋亡，但是對Beclin1的表達沒有調(diào)節(jié)作用