苦參堿對(duì)長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用及其對(duì)Ras-Raf-ERK1-2信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：
　　觀察苦參堿（Matrine,MT）對(duì)長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用，并研究Ras/Raf/ERK1/2信號(hào)通路對(duì)其鎮(zhèn)痛作用的影響。
　　方法：
　　1.行為藥理學(xué)方法采用機(jī)械刺痛法測(cè)定小鼠的機(jī)械縮足反射閾值；熱輻射刺激法測(cè)定小鼠的熱縮足反射潛伏期；冷板法測(cè)定小鼠的冷縮足反射次數(shù)；壓痛法測(cè)定小鼠的壓痛閾值。通過以上實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)MT對(duì)長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛的作用。
　　2.電生理實(shí)驗(yàn)方法觀

2、察小鼠坐骨-腓神經(jīng)動(dòng)作電位，測(cè)定感覺神經(jīng)動(dòng)作電位振幅及神經(jīng)傳導(dǎo)速度，觀察MT對(duì)長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛的影響。
　　3.組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法采用HE染色法觀察長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛小鼠的坐骨神經(jīng)、背根神經(jīng)節(jié)以及脊髓背角的組織病理改變情況，進(jìn)而評(píng)價(jià)MT對(duì)長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛小鼠的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　4.免疫熒光標(biāo)記技術(shù)測(cè)定MT對(duì)小鼠脊髓背角星型膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物GFAP以及p-ERK1/2的免疫熒光強(qiáng)度，分析脊髓星

3、型膠質(zhì)細(xì)胞、p-ERK1/2與MT鎮(zhèn)痛作用的關(guān)系。
　　5.q-PCR方法檢測(cè)小鼠脊髓中Ras、c-Raf及ERK1/2 mRNA含量，分析脊髓中Ras、c-Raf及ERK1/2 mRNA的表達(dá)對(duì)MT鎮(zhèn)痛作用的影響。
　　6.Western blot方法檢測(cè)MT對(duì)小鼠脊髓背角Ras、c-Raf、p-c-Raf、ERK1/2、p-ERK1/2、TNF-α、IL-6以及IL-10蛋白含量的影響，分析脊髓Ras、c-Raf、p-c

4、-Raf、ERK1/2、p-ERK1/2、TNF-α、IL-6以及IL-10與 MT鎮(zhèn)痛作用的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.MT對(duì)長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛的鎮(zhèn)痛作用
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射 MT60mg/kg可顯著提高小鼠機(jī)械縮足反射閾值(p<0.01)；可延長(zhǎng)小鼠熱縮足反射潛伏期(p<0.01)；可提高小鼠機(jī)械壓痛閾值(p<0.01)；可減少冷抬足次數(shù)（p<0.01）。
　　2.MT對(duì)坐骨神經(jīng)電生

5、理活動(dòng)的影響
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射MT30、60mg/kg后可明顯提高小鼠感覺神經(jīng)動(dòng)作電位振幅（p<0.01），腹腔注射MT60mg/kg后可明顯加快感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度（p<0.01）。
　　3.MT對(duì)坐骨神經(jīng)、背根神經(jīng)節(jié)以及脊髓背角病理變化的影響
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射MT60mg/kg后可明顯恢復(fù)小鼠坐骨神經(jīng)、背根神經(jīng)節(jié)以及脊髓背角組織病理變化。
　　4.MT對(duì)小鼠脊髓背角GFAP免疫

6、熒光強(qiáng)度的影響
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射MT60mg/kg可明顯降低小鼠脊髓背角GFAP免疫熒光強(qiáng)度(p<0.01)。
　　5.MT對(duì)小鼠脊髓TNF-α,IL-6及IL-10蛋白的影響
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射MT60mg/kg可明顯降低小鼠脊髓TNF-α,IL-6蛋白表達(dá)，升高IL-10蛋白表達(dá)(p<0.01)。
　　6.MT對(duì)小鼠脊髓p-ERK1/2免疫熒光強(qiáng)度，Ras、c-Raf、p-c

7、-Raf、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白含量及Ras、c-Raf、ERK1/2mRNA表達(dá)的影響
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射MT60mg/kg可明顯降低小鼠脊髓背角p-ERK1/2免疫熒光強(qiáng)度(p<0.01)；同時(shí)可使小鼠脊髓Ras、p-c-Raf、p-ERK1/2蛋白含量及Ras、c-Raf、ERK1/2mRNA表達(dá)降低(p<0.01)，但對(duì)c-Raf、ERK1/2蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響。
　　結(jié)論：
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