Wnt抑制劑LGK-974對(duì)HepG2細(xì)胞輻射增敏作用的研究.pdf

1、目的:腫瘤的惡性增殖和輻射耐受制約了放療效果。LGK-974能有效抑制細(xì)胞增殖基因Wnt的表達(dá)，并同時(shí)抑制抗氧化基因Nrf2的作用，提高癌細(xì)胞對(duì)輻射的敏感性，明顯提高輻射對(duì)癌細(xì)胞的殺傷作用，有望成為新的輻射增敏藥物。本研究旨在探討LGK-974對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG2的輻射增敏作用。
　　方法:(1)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞，分為空白對(duì)照組，單純照射組，LGK-974組和照射聯(lián)合LGK-974組。單純照射組給予0、4、6、8Gy照

2、射，照射聯(lián)合LGK-974組中LGK-974的濃度為10μmol/L。(2) MTT法檢測(cè)HepG2細(xì)胞的增殖。(3)細(xì)胞克隆形成法確定1.0μ M LGK-974對(duì)HepG2細(xì)胞放療敏感性的影響。(4)H2DCFH-DA探針流式細(xì)胞法檢測(cè)細(xì)胞活性氧(Reactive oxygen species，ROS)水平。(5)免疫熒光法檢測(cè)Nrf2在HepG2細(xì)胞中的分布。(6) RT-PCR及WesternBlot法檢測(cè)Wnt和Nrf2及其下

3、游NQO-1、HO-1基因的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:(1) LGK-974抑制HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)分裂和增殖，24、48、72 h的半抑制濃度(IC50)為4.3、2.14、0.536μ M(p＜0.05)。(2)1.0μ M LGK-974對(duì)HepG2細(xì)胞的放射增敏比(SERD0)為1.37。(3) LGK-974能增大輻射產(chǎn)生的ROS水平(p＜0.05)。(4)照射后的HepG2細(xì)胞細(xì)胞核中Nrf2明顯增多，LGK

4、-974能夠抑制Nrf2進(jìn)入細(xì)胞核。(5)照射后Nrf2及其下游基因HO-1、NQO-1的轉(zhuǎn)錄水平和表達(dá)水平均增加; LGK-974能降低輻射對(duì)Nrf2、HO-1和NQO-1的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平的增加作用(p＜0.05）。
　　結(jié)論:LGK-974對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2具有明顯的輻射增敏作用，其輻射增敏特性與抑制Wnt和Nrf2信號(hào)通路有關(guān)，抑制細(xì)胞增殖并阻止細(xì)胞緩解輻射產(chǎn)生的氧化壓力。LGK-974作為一種新的Wnt抑制劑，有望成