艱難梭菌多位點(diǎn)序列分型及感染危險(xiǎn)因素的流行病學(xué).pdf

1、目的:
　　1、研究某三級(jí)甲等醫(yī)院重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)抗生素相關(guān)性腹瀉（AAD）患者艱難梭菌檢出情況，艱難梭菌毒素?cái)y帶特征，同時(shí)使用多位點(diǎn)序列分型(MLST)、隨機(jī)引物PCR分析（RAPD），了解本地區(qū)艱難梭菌的基因型別，主要流行菌株，并以MLST為參考，比較RAPD方法是否適合艱難梭菌分型。本研究數(shù)據(jù)可與國(guó)際上其他地區(qū)流行菌株進(jìn)行比較并補(bǔ)充艱難梭菌MLST數(shù)據(jù)庫(kù)。
　　2、研究AAD患者中艱難梭菌相關(guān)性腹瀉(CDAD)的構(gòu)

2、成比，CDAD患者在ICU住院患者的發(fā)病率，并通過多因素分析比較非艱難梭菌導(dǎo)致的AAD與CDAD患者在感染危險(xiǎn)因素方面的差異。為臨床治療、預(yù)防、監(jiān)測(cè)CDAD，并制定合理的防治方案提供數(shù)據(jù)支持。
　　方法:
　　對(duì)2013年6月-2014年2月期間，某院綜合ICU、神經(jīng)內(nèi)科ICU、神經(jīng)外科ICU、呼吸ICU發(fā)生AAD的患者取大便標(biāo)本使用CDMN選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行厭氧培養(yǎng)。通過常規(guī)培養(yǎng)+分子生物學(xué)技術(shù)鑒定艱難梭菌。隨后對(duì)其A、B毒

3、素基因tcdA、tcdB，二元毒素基因cdtA、cdtB進(jìn)行擴(kuò)增，了解毒素?cái)y帶情況。對(duì)艱難梭菌7個(gè)管家基因進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序，通過MLST數(shù)據(jù)庫(kù)獲得基因ST型，采用RAPD方法對(duì)艱難梭菌進(jìn)行分型，cross checker得出矩陣，NTsys2.10e軟件clustering功能分析得出的樹狀圖。使用bionumerics軟件對(duì)MLST和RAPD數(shù)據(jù)及艱難梭菌基本信息構(gòu)建復(fù)合樹狀圖，并進(jìn)行兩種方法的比對(duì)。以ICU患者住院日為分母，醫(yī)療機(jī)構(gòu)發(fā)

4、生的醫(yī)院感染CDAD（HOHA CDAD）患者數(shù)為分子，得出CDAD發(fā)病率。通過填寫艱難梭菌感染患者調(diào)查表，并使用Epidate錄入數(shù)據(jù)，使用SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，對(duì)單因素計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，對(duì)多因素采用Backward: LR法進(jìn)行逐步Logistic回歸分析。
　　結(jié)果:
　　1.從4個(gè)ICU的394例患者725份標(biāo)本中共分離出40株艱難梭菌，其中32株來源于非重復(fù)患者標(biāo)本，主要來自于綜合

5、ICU12株，神經(jīng)內(nèi)科ICU23株，神經(jīng)外科ICU5株，呼吸ICU未檢測(cè)到艱難梭菌。有25株檢測(cè)出tcdA，33株檢測(cè)出tcdB，艱難梭菌毒素A+B+菌株25株，占62.50％，A-B+菌株8株，占20.00％，A-B-菌株7株，占17.50％，未檢測(cè)出A+B-菌株。檢測(cè)到一株cdtA和cdtB基因陽性艱難梭菌。
　　2.40株艱難梭菌經(jīng)MLST分析共分為9個(gè)ST型，來源于3個(gè)clade， ST54（9株）、ST39（7株）、ST

6、26（6株）、ST3(4株)、ST37（3株）、ST35（2株）、ST48（2株）、ST2（2株），ST17、ST201、ST33、ST133分別為1株，其中ST201，clade3為二元毒素陽性菌株。另外本研究中發(fā)現(xiàn)一株新的ST型別，經(jīng)提交MLST數(shù)據(jù)核實(shí)為ST274。RAPD基因指紋圖譜分型，共有27個(gè)型別，其中最常見的為R20型，共有5株，其次為R13型4株，R6有3株，其余型別均有1-2株。將RAPD指紋圖譜與ST型進(jìn)行聚類分析

7、，發(fā)現(xiàn)R20型對(duì)應(yīng)的ST型別為ST26，R13對(duì)應(yīng)ST54，R6對(duì)應(yīng)ST37，由于存在單個(gè)條帶的差異，ST39分布在R1-R5之間，而R1-R5相互之間是亞型的關(guān)系。
　　3.HOHA CDAD發(fā)病率為16.60/10，000住院日，其中神內(nèi)ICU的HOHA CDAD發(fā)病率為42.82/10，000住院日，CDAD占AAD患者構(gòu)成比為8.12％(32/394)。
　　4.CDAD與AAD中非CDAD患者對(duì)比，經(jīng)單因素分析，過

8、去一個(gè)月使用抗生素(x2值=12.30，P=0.00)、胃腸外營(yíng)養(yǎng)(x2值=4.72，P=0.03)、腹瀉前住院天數(shù)(t=-2.12，P=0.03)，腹瀉前使用抗生素天數(shù)(t=-1.99，P=0.05)4個(gè)危險(xiǎn)因素。經(jīng)多因素Logistic回歸分析，一月前使用抗生素，腹瀉前的住院天數(shù)，是導(dǎo)致住院患者CDAD的危險(xiǎn)因素。其中一月前使用抗生素對(duì)未使用抗生素導(dǎo)致CDAD的發(fā)病比數(shù)比例高達(dá)7.30倍，腹瀉前住院天數(shù)每增加一個(gè)等級(jí)CDAD的發(fā)病比