MyD88在中國鹵蟲不同發(fā)育時期及在革蘭氏菌刺激下的表達模式.pdf

1、中國鹵蟲(Artemia sinica)屬于節(jié)肢動物門(Phylum Arthropoda),甲殼綱(ClassCrustacea),鰓足亞綱(Subclass Branchiopoda),無甲目(Order Anostaca),鹵蟲科(FamilyArtemiidae),鹵蟲屬(Genus Artemia)。鹵蟲廣泛分布在沿海及內(nèi)陸高鹽水體中,是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的重要餌料生物。由于鹵蟲發(fā)育過程短并可抵抗干燥、高溫、高鹽等不良環(huán)境,使其成為

2、一種重要的實驗動物而被廣泛研究,特別是作為先天免疫研究的實驗材料發(fā)揮了重要的作用。無脊椎動物沒有特異性免疫,先天免疫是其唯一的防御機制。在其先天免疫反應(yīng)中,Toll途徑在抗真菌及抗革蘭氏陽性菌應(yīng)答誘導(dǎo)抗菌肽表達過程中是必需的,而MyD88是Toll信號途徑中的一個關(guān)鍵的轉(zhuǎn)接蛋白。當(dāng)機體受到感染后Spatzle活化Toll,Toll將信號傳給MyD88,再以MyD88為中心引發(fā)一系列信號級聯(lián)反應(yīng)做出免疫應(yīng)答反應(yīng)。此外,在果蠅胚胎發(fā)育過程中

3、發(fā)現(xiàn)MyD88對果蠅背腹軸的形成有一定的作用。所以對鹵蟲胚胎發(fā)育和免疫機制過程中MyD88基因表達模式的研究有著十分重要的意義。本論文以中國鹵蟲為實驗材料,采用分子生物學(xué)技術(shù)克隆了中國鹵蟲MyD88基因部分片段,經(jīng)Blast比對確定該序列為中國鹵蟲MyD88基因。采用RACE技術(shù)獲得了1555bp的中國鹵蟲MyD88基因的cDNA全序列。對其進行分子生物學(xué)分析發(fā)現(xiàn)該序列包括一個長度為1182bp的開放閱讀框,編碼393個氨基酸,蛋白結(jié)構(gòu)

4、及氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)其包含MyD88特有的N端死亡結(jié)構(gòu)域,C端含有TIR結(jié)構(gòu)域的box1、box2基序。經(jīng)整體免疫組化技術(shù)發(fā)現(xiàn)中國鹵蟲MyD88基因表達部位主要集中于頭、胸部,推測可能與鹵蟲免疫因子形成有關(guān)。實時定量PCR技術(shù)對MyD88在鹵蟲胚胎發(fā)育不同時期表達量進行研究,發(fā)現(xiàn)MyD88在中國鹵蟲胚胎發(fā)育各時期呈組成性表達,并且呈現(xiàn)先高后低的趨勢,在0h和5h表達量最高,其他各時期差別不大。推測MyD88可能在鹵蟲胚胎發(fā)育中作為一種母