p62-SQSTM1調(diào)控TBK1磷酸化參與RNA病毒誘導(dǎo)天然免疫應(yīng)答機(jī)制的研究.pdf

1、p62/SQSTM1是參與細(xì)胞代謝和應(yīng)激反應(yīng)的重要信號(hào)傳導(dǎo)中心，作為“腳手架”蛋白，p62通過與不同信號(hào)分子相互作用，調(diào)控細(xì)胞自噬、氧化應(yīng)激和天然免疫。天然免疫是宿主防御外來入侵病原體的第一道防線，宿主通過胚系基因編碼的模式識(shí)別受體識(shí)別病原相關(guān)分子模式進(jìn)而激活下游信號(hào)通路，產(chǎn)生多種細(xì)胞因子抵抗病原體侵襲。針對(duì)RNA病毒，宿主主要利用膜結(jié)合的Toll樣受體和胞質(zhì)中的RIG-Ⅰ樣受體識(shí)別病毒核酸。在RIG-Ⅰ樣受體介導(dǎo)的細(xì)胞Ⅰ型干擾素免疫應(yīng)

2、答中，TBK1作為激酶直接催化重要調(diào)控因子IRF3磷酸化，誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素IFN-β產(chǎn)生發(fā)揮抗病毒作用。同時(shí)TBK1還催化NF-κB相關(guān)蛋白磷酸化，激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，是聯(lián)系Ⅰ型干擾素信號(hào)通路和NF-κB信號(hào)通路的關(guān)鍵激酶。以往研究發(fā)現(xiàn)p62通過與TRAF6等分子相互作用調(diào)控NF-κB的激活，而TRAF6還參與細(xì)胞Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生。在病毒誘導(dǎo)的天然免疫應(yīng)答中，關(guān)鍵接頭分子MAVS被模式識(shí)別受體活化后招募TRAF6，利用TRAF6促進(jìn)I

3、KKγ的泛素化使之活化進(jìn)而招募TBK1等分子，激活Ⅰ型干擾素表達(dá)。鑒于p62可調(diào)控TRAF6的活性影響NF-κB活化以及TBK1作為關(guān)鍵激酶聯(lián)系著NF-κB信號(hào)通路和Ⅰ型干擾素信號(hào)通路，p62可能也參與宿主Ⅰ型干擾素免疫應(yīng)答，然而p62是否影響病毒感染誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生目前尚不清楚。本研究旨在明確p62對(duì)RNA病毒誘導(dǎo)IFN-β產(chǎn)生的影響及其作用機(jī)制。發(fā)現(xiàn)敲減p62可導(dǎo)致RNA病毒感染誘導(dǎo)的細(xì)胞IRF3二聚化減弱、ISRE報(bào)告質(zhì)粒表達(dá)

4、水平和IFN-βmRNA水平下調(diào)，表明干擾p62的表達(dá)可影響宿主細(xì)胞Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生并且通過進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)p62作用于IRF3上游。通過免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)p62與TBK1相互作用，而且敲減p62可抑制IRF3的磷酸化。利用體外激酶實(shí)驗(yàn)并檢測(cè)TBK1磷酸化水平，發(fā)現(xiàn)敲減p62可導(dǎo)致TBK1Ser172位磷酸化水平下調(diào)抑制TBK1激酶活性從而抑制TBK1催化IRF3磷酸化。通過體外磷酸酶實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞敲減p62導(dǎo)致的TBK1Ser172磷酸化減弱

5、是由磷酸酶PP2A活性增強(qiáng)催化TBK1去磷酸化引起的。此外還發(fā)現(xiàn)敲減p62可促進(jìn)仙臺(tái)病毒SeV、水皰性口炎病毒VSV和呼吸道合胞病毒RSV的復(fù)制。
　　綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)在RNA病毒感染誘導(dǎo)的天然免疫應(yīng)答中p62通過抑制磷酸酶PP2A對(duì)TBK1去磷酸化調(diào)控TBK1激酶活性的分子機(jī)制，為自噬與天然免疫相互調(diào)控提供了新的機(jī)制，進(jìn)一步豐富了對(duì)細(xì)胞自噬與天然免疫相互聯(lián)系相互調(diào)控共同發(fā)揮抗病毒作用的認(rèn)識(shí)，為尋找潛在抗病毒藥物靶點(diǎn)提供了新方