B型流感病毒誘發(fā)天然免疫應(yīng)答及M1核質(zhì)穿梭對(duì)于病毒復(fù)制的調(diào)控研究.pdf

1、與A型流感病毒常引起世界大流行相比，B型流感病毒一般引起局部流行，嚴(yán)重情況下可致人死亡。作為一種重要的流行病病因，B型流感病毒的復(fù)制機(jī)理及免疫學(xué)特征仍有待于研究。病毒感染機(jī)體后，首先觸發(fā)機(jī)體的天然免疫應(yīng)答。細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在B型流感病毒感染早期，Ⅰ型和Ⅲ型干擾素、干擾素誘導(dǎo)基因以及前炎癥因子等細(xì)胞因子快速并且高水平表達(dá)。RIG-Ⅰ是細(xì)胞內(nèi)重要的RNA病毒核酸受體，利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除細(xì)胞內(nèi)RIG-Ⅰ基因以后，我們發(fā)現(xiàn)B型

2、流感病毒感染后RIG-Ⅰ下游轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、IRF3和STAT1的磷酸化水平及細(xì)胞因子表達(dá)量急劇下調(diào)，顯示B型流感病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞因子產(chǎn)生是RIG-Ⅰ通路依賴型。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，B型流感病毒在感染早期促進(jìn)RIG-Ⅰ及其E3泛素連接酶TRIM25的線粒體定位，并且強(qiáng)烈誘導(dǎo)RIG-Ⅰ Lys63(K63)連接的聚泛素化修飾。同時(shí)，TRIM25與B型流感病毒NS1蛋白(NS1-B)N端RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(RBD)結(jié)合，與RIG-Ⅰ形成RIG-

3、Ⅰ/TRIM25/NS1-B復(fù)合物，阻止了NS1-B C端效應(yīng)結(jié)構(gòu)域(TED)對(duì)RIG-Ⅰ泛素化的抑制，從而保證RIG-Ⅰ能迅速發(fā)生泛素化修飾。綜上所述，在B型流感病毒感染早期，RIG-Ⅰ迅速發(fā)生調(diào)節(jié)性泛素化修飾，并定位于線粒體向下游傳導(dǎo)信號(hào)，引起下游轉(zhuǎn)錄因子的活化，細(xì)胞因子大量產(chǎn)生。其中，TRIM25發(fā)揮對(duì)信號(hào)通路的正向調(diào)節(jié)作用。
　　B型流感病毒是由8條單負(fù)鏈RNA組成的囊膜病毒。其基因組共編碼13種蛋白，其中基質(zhì)蛋白M1(B

4、M1)除了作為病毒結(jié)構(gòu)蛋白外，是否參與對(duì)病毒復(fù)制的調(diào)控尚不清楚。通過(guò)對(duì)BM1在B型流感病毒感染早期和晚期存在核質(zhì)穿梭現(xiàn)象的觀察，我們鑒定出BM1序列上存在兩個(gè)CRM1依賴的出核信號(hào)肽(NES)(3-14位氨基酸和124-133位氨基酸)和1個(gè)入核信號(hào)肽(NLS)（76-94位氨基酸），并找出了關(guān)鍵性的氨基酸位點(diǎn)。同時(shí)利用質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)了BM1蛋白NLS存在2個(gè)位點(diǎn)的磷酸化修飾，即Thr80(T80)和Ser84(S84)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，