大黃附子湯對(duì)于失血性休克復(fù)蘇后大鼠腸道菌群的影響及其意義.pdf

1、背景：既往研究發(fā)現(xiàn)，大黃附子湯能夠有效的改善失血性休克復(fù)蘇后腸道屏障功能。其中包括增加小腸的供血，降低脂肪酸結(jié)合蛋白(IFABP)含量和血清內(nèi)毒素（LPS）的水平，上調(diào)ZO-1，Occludin表達(dá)，從而減輕失血性休克復(fù)蘇對(duì)于腸道的損傷。然而大黃附子湯對(duì)于失血性休克復(fù)蘇腸道菌群的影響仍不清楚。在本次實(shí)驗(yàn)中，我們研究了失血性休克復(fù)蘇對(duì)于大鼠胃、回腸末端、升結(jié)腸以及乙狀結(jié)腸內(nèi)定殖菌的影響，以及大黃附子湯在失血性休克復(fù)蘇后對(duì)于各個(gè)腸段腸道微生

2、物的作用。
　　方法：健康SPF級(jí)雄性大鼠，36只，隨機(jī)分成3組：對(duì)照組、失血性休克復(fù)蘇組、大黃附子湯組。其中對(duì)照組共6只。失血性休克復(fù)蘇組18只，之后再按失血性休克復(fù)蘇模型制備成功后12、24、48h分為三個(gè)亞組。大黃附子湯組12只，之后再按照失血性休克復(fù)蘇模型制備成功后12、24h分成兩個(gè)亞組。失血性休克復(fù)蘇組在復(fù)蘇成功即刻、12、24h予以2ml無(wú)菌生理鹽水保留灌腸。大黃附子湯組在在復(fù)蘇成功即刻、12h予以2ml大黃附子湯保

3、留灌腸。失血性休克復(fù)蘇組在處死動(dòng)物前采用動(dòng)態(tài)比濁方法檢測(cè)血清內(nèi)毒素（LPS）的水平。各亞組在時(shí)間點(diǎn)處死大鼠，收集各個(gè)腸段組織樣本（大約2cm左右）,經(jīng)無(wú)菌生理鹽水沖洗多余的腸腔內(nèi)容物，用棉簽輕輕地刮擦腸粘膜。刮擦得到的腸粘膜內(nèi)容物立即處放于液氮當(dāng)中，之后轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱中儲(chǔ)存。刮擦的粘膜組織用于下一步的DNA提取。我們對(duì)大鼠腸道細(xì)菌16S rRNA基因v3-v4可變區(qū)進(jìn)行Illumina測(cè)序分析。
　　結(jié)果：失血性休克復(fù)蘇對(duì)大鼠

4、各腸段腸粘膜菌群的影響：（1）與對(duì)照組比較，在失血性休克復(fù)蘇24、48h時(shí)胃內(nèi)微生物多樣性顯著降低。在門(mén)水平上所有失血性休克復(fù)蘇亞組中（12、24、48h）厚壁菌門(mén)（Firmicutes）相對(duì)豐度顯著增高。與此同時(shí)，擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes）和變形菌門(mén)（Proteobacteria）相對(duì)豐度顯著降低。在屬水平上，乳酸菌屬(Lactobacillus)相對(duì)豐度顯著升高,而芽孢桿菌屬（Bacillus）、乳球菌屬（Lactoco

5、ccus）、嗜麥芽窄食單胞菌屬（Stenotrophomonas）、假單胞菌屬（Pseudomonas）、卟啉單胞菌屬（Porphyromonas）相對(duì)豐度顯著降低。（2）與對(duì)照組比較，在失血性休克復(fù)蘇48h時(shí)回腸末端微生物多樣性顯著增高。與此同時(shí)，在門(mén)水平上擬桿菌門(mén)相對(duì)豐度顯著增高。在屬水平上，在失血性休克復(fù)蘇12h和24h時(shí)乳酸菌屬相對(duì)豐度顯著升高，失血性休克復(fù)蘇48h恢復(fù)正常。但在此時(shí)，F(xiàn)aecalibacterium、Subdo

6、ligranulum、[Eubacterium]_coprostanoligenes_group、 Ruminococcaceae-UCG-002、Ruminococcaceae-UCG-013、Barnesiella、Alistipes、Parabacteroides菌屬相對(duì)豐度顯著升高。在失血性休克復(fù)蘇24h時(shí)回腸末端菌屬 Bacteroides和Alistipes過(guò)度增殖和血清LPS升高呈正相關(guān)。（3）與對(duì)照組比較，在失血性休克復(fù)

7、蘇24h時(shí)升結(jié)腸微生物多樣性顯著降低。與此同時(shí)，在門(mén)水平上擬桿菌門(mén)豐度顯著增高，而厚壁菌門(mén)豐度顯著降低。在屬水平上，在失血性休克復(fù)蘇24h時(shí)普雷沃氏菌屬(Prevotella_9)相對(duì)豐度顯著增高，胃瘤球菌屬(Ruminococcus_1）、毛螺旋菌科(Lachnospiraceae_NK4A136_group)和Ruminiclostridium_9相對(duì)豐度顯著降低。（4）失血性休克復(fù)蘇對(duì)乙狀結(jié)腸段菌群微生物沒(méi)有產(chǎn)生任何影響。

8、　　大黃附子湯對(duì)失血性休克復(fù)蘇大鼠腸粘膜菌群的影響：與失血性休克復(fù)蘇24h組比較，大黃附子湯提升了升結(jié)腸段厚壁菌門(mén)（Firmicutes）相對(duì)豐度,并且有效的抑制了擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes）的增殖。在屬水平上大黃附子湯提升了胃瘤球菌屬(Ruminococcus_1）的相對(duì)豐度，并且降低了普雷沃氏菌屬(Prevotella_9)的相對(duì)豐度。
　　結(jié)論：在本次研究中，一方面我們發(fā)現(xiàn)了失血性休克復(fù)蘇在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)于各個(gè)腸段腸