高壓氧對(duì)失血性休克復(fù)蘇后炎癥反應(yīng)的影響.pdf

1、目的:失血性休克是臨床常見(jiàn)的危重癥之一，許多因素包括缺血、缺氧、再灌注損傷參與了其病理過(guò)程?；钚匝鹾偷踝杂苫倪^(guò)度產(chǎn)生可觸發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合癥，過(guò)度的全身性炎癥是失血性休克由可逆向不可逆轉(zhuǎn)化的重要原因之一，與休克的預(yù)后有明顯關(guān)系。因此，在失血性休克的早期，除進(jìn)行積極的液體復(fù)蘇外，采取抗炎治療措施，阻斷或減少炎性介質(zhì)的生成和釋放，對(duì)于阻止失血性休克的病程發(fā)展有重要意義。高壓氧已經(jīng)被證明能減輕局部如骨胳肌[1，2]小腸[3]，皮瓣[4]，

2、肝[5]，以及一氧化碳中毒[6]后缺血再灌注損傷，有研究表明高壓氧可減輕脂多糖(LPS)[7]或酵母多糖(zymosan)[8]誘發(fā)感染性休克時(shí)的炎癥反應(yīng)，國(guó)外有研究表明高壓氧可以減輕失血后肝臟腫瘤壞死因子-αmRNA(TNF-αmRNA)和血漿腫瘤壞死因子(TNF-α)水平以及肝白細(xì)胞介-6mRNA(IL-6mRNA)和血漿白細(xì)胞介素-6(IL-6)水平[9]。而對(duì)于失血性休克引起的全身炎癥反應(yīng)甚至多器官功能障礙的高壓氧治療很少有報(bào)導(dǎo)

3、。本研究目的在建立大鼠失血性休克復(fù)蘇模型過(guò)程中應(yīng)用高壓氧治療，以觀察高壓氧對(duì)失血性休克復(fù)蘇后炎癥反應(yīng)的影響，同時(shí)探討其機(jī)制。 研究對(duì)象與方法:1.動(dòng)物分組：Wistar大鼠隨機(jī)分為三組，每組24只大鼠。對(duì)照組：只進(jìn)行手術(shù)操作，不放血誘導(dǎo)休克；休克組：誘導(dǎo)休克并進(jìn)行常規(guī)補(bǔ)血、補(bǔ)液復(fù)蘇。復(fù)蘇后立即拔除插管、結(jié)扎血管、閉合傷口。高壓氧組：誘導(dǎo)休克并進(jìn)行常規(guī)補(bǔ)血、補(bǔ)液復(fù)蘇，復(fù)蘇后立即拔除插管、結(jié)扎血管、閉合傷口。立即送入高壓氧艙，先以純

4、氧洗艙保持10分鐘內(nèi)壓力為0.2Mpa，氧濃度大于99.5％停留40分鐘。其間換氣10分鐘，減壓15分鐘出艙。送入氧艙約1小時(shí)。 2.失血性休克復(fù)蘇動(dòng)物模型制備[10] Wistar大鼠，體重260-300g。中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄不限，速眠新(0.4ml/kg)在25℃室溫下腹腔內(nèi)給藥麻醉，右股動(dòng)脈插入套管針(Intima24GA)，連接多導(dǎo)生理記錄儀(POLYGRAPHRM6000，日本)，監(jiān)測(cè)血壓；左頸

5、靜脈插入套管針(Intima22GA)保留為復(fù)蘇通路，右頸動(dòng)脈插入套管針(Intima22GA)，另一端連接肝素化玻璃注射器中，進(jìn)行放血誘導(dǎo)休克，在5min內(nèi)使血壓下降并維持平均動(dòng)脈壓30～35mmHg。通過(guò)輸、抽少量血維持低血壓狀態(tài)55min。低血壓60min后，用60％自體血量給大鼠進(jìn)行復(fù)蘇5min，同時(shí)用兩倍血量的生理鹽水通過(guò)微量輸液泵進(jìn)行補(bǔ)充55min。 3.指標(biāo)檢測(cè) 麻醉后計(jì)0小時(shí)，2.5小時(shí)時(shí)誘導(dǎo)休克(對(duì)照組

6、不誘導(dǎo)，僅暴露并分離上述三處血管)，3.5小時(shí)時(shí)開(kāi)始復(fù)蘇(對(duì)照組不復(fù)蘇)，4.5小時(shí)時(shí)復(fù)蘇結(jié)束，每組動(dòng)物根據(jù)2.5小時(shí)、3.5小時(shí)、4.5小時(shí)、24小時(shí)，分成四個(gè)亞組(n=6)。大鼠分別按以上四個(gè)時(shí)點(diǎn)采血2毫升后處死，其中50μl加入5ml生理鹽水中離心去上清留取底部紅細(xì)胞。其余離心后取血漿。放免法檢測(cè)外周血腫瘤壞死因子(TNF-α)，TNF-α放射免疫藥盒購(gòu)于北京科美東雅生物技術(shù)有限公司。比色法檢測(cè)誘生性一氧化氮合成酶(iNOS)，i

7、NOS測(cè)試盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。羥胺法檢測(cè)大鼠紅細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)。SOD測(cè)試盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。 4.病理學(xué)檢查 三組動(dòng)物在24小時(shí)后活殺取材，留取肝臟左葉、小腸、肺。石蠟包埋，切片，經(jīng)HE染色常規(guī)病理學(xué)光鏡檢查，24小時(shí)處死的大鼠所取得的腸[11]、肺[12]、肝[13]組織分別進(jìn)行損傷評(píng)分。 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS11.5ForWindows軟件處理數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)以均數(shù)±

8、標(biāo)準(zhǔn)誤((-x)±s(-x))表示，采用單因素ANOVA(analysisofvariance)檢驗(yàn)，獨(dú)立樣本間比較采用posthoc(SNK)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果:1.血紅細(xì)胞SOD含量變化 2.5小時(shí)，3.5小時(shí)三組動(dòng)物血紅細(xì)胞中SOD含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.5小時(shí)高壓氧組與休克組動(dòng)物血紅細(xì)胞SOD含量差異無(wú)顯著性。對(duì)照組與高壓氧組和休克組相比差異具有顯著性(P＜0.05)。24小時(shí)高壓氧組

9、血紅細(xì)胞SOD值高于休克組，休克組血紅細(xì)胞SOD值低于假休克組，高壓氧組血紅細(xì)胞SOD值高于假休克組，差異均具有顯著性(P＜0.05)。 2.血漿iNOS含量變化 2.5小時(shí)，3.5小時(shí)三組動(dòng)物血漿iNOS含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.5小時(shí)高壓氧組與休克組動(dòng)物血漿iNOS含量差異無(wú)顯著性。對(duì)照組與高壓氧組和休克組相比差異具有顯著性(P＜0.05)。24小時(shí)高壓氧組血漿iN-OS值低于休克組，休克組血漿iNOS值高于對(duì)照組，

10、高壓氧組血漿iNOS值低于對(duì)照組，差異均具有顯著性(P＜0.05)。 3.血漿TNF-α含量變化 2.5小時(shí)，3.5小時(shí)三組動(dòng)物血漿TNF-α含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.5小時(shí)高壓氧組與休克組動(dòng)物血漿TNF-α含量差異無(wú)顯著性。對(duì)照組與高壓氧組和休克組相比差異具有顯著性(P＜0.05)。24小時(shí)高壓氧組血漿TNF-α值低于休克組，高壓氧組血漿TNF-α值低于對(duì)照組，休克組血漿TNF-α值高于對(duì)照組，差異均具有顯著性(P＜0

11、.05)。 4.病理?yè)p傷評(píng)分： 24小時(shí)處死的大鼠所取得的腸、肺、肝組織分別進(jìn)行損傷評(píng)分，腸損傷按照Park’s腸損傷評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[11]進(jìn)行評(píng)分，肺損傷按照Nishina肺損傷評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[12]進(jìn)行評(píng)分，肝損傷評(píng)分按照Schimdt肝損傷評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[13]進(jìn)行評(píng)分。24小時(shí)休克組大鼠腸、肝、肺病理?yè)p傷明顯，高壓氧顯著減輕了大鼠腸、肝、肺組織的水腫、出血、及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。差異均具有顯著性(P＜0.05)。 結(jié)論:本研究中