正常肝和肝癌細(xì)胞中DHRS4L2基因選擇性剪接亞型的克隆及其表達(dá)調(diào)控研究.pdf

1、目的：全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，atRA)是生物體內(nèi)存在的正常脂溶性生理活性物質(zhì)。除在胚胎發(fā)育中是器官、系統(tǒng)正常結(jié)構(gòu)形成的內(nèi)源性形態(tài)原(morphogen)外, atRA對(duì)促進(jìn)生物的正常分化、免疫調(diào)節(jié)、抗感染，以及抑制（腫瘤）細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖，誘導(dǎo)（腫瘤）細(xì)胞分化、凋亡等方面具有廣泛的生物學(xué)作用。atRA是由維生素A經(jīng)兩步氧化代謝而成。
　　 動(dòng)物輔酶II-依賴性視黃醇脫氫/還原酶（NADP(H

2、)-dependent retinol dehydrogenase /reductase，NRDR），是一種參與atRA合成代謝的重要視黃醇脫氫/還原酶，廣泛分布于各種哺乳動(dòng)物組織。編碼人的NRDR基因定位于染色體14q11.2。該基因共有三個(gè)拷貝，串聯(lián)成簇，分別為DHRS4，DHRS4L2，DHRS4L1，前二者的同源性為97.5%。在DHRS4與DHRS4L2，DHRS4L2與DHRS4L1之間各有一約20000 bp的插入片段（i

3、nsertion 1and insertion 2）。既往的研究表明，在腫瘤細(xì)胞中，尤其是人神經(jīng)母細(xì)胞瘤中，存在很多的DHRS4L2基因的選擇性剪接亞型?，F(xiàn)有的DHRS4L2轉(zhuǎn)錄本的研究結(jié)果顯示，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物多缺乏外顯子1（E1），所替代的第一個(gè)外顯子均為DHRS4L2基因參考序列的E1上游大約19kb處的一段序列，命名為外顯子a（Ea）。已知Ea在正常的人腦，睪丸，胎盤和食道癌等組織中均表達(dá)。然而，在人肝臟中是否存在同樣的剪接模式和剪接

4、亞型仍缺乏研究。 DHRS4基因簇序列分析表明Ea和DHRS4L2 E1上游區(qū)域均存在CpG島。對(duì)DHRS4基因簇的CpG島進(jìn)行甲基化狀態(tài)檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，DHRS4L2 E1前的CpG位點(diǎn)完全甲基化而Ea以及DHRS4的第一個(gè)外顯子前的CpG島則處于非甲基化狀態(tài)，提示DHRS4L2的轉(zhuǎn)錄可能受CpG島甲基化的調(diào)節(jié)。本研究鑒定正常肝細(xì)胞HL-7702和肝癌細(xì)胞Hep-G2 DHRS4L2的選擇性剪接新亞型，并探討其表達(dá)調(diào)控機(jī)制與甲基化的關(guān)系。

5、
　　 DHRS4L2 E1前的CpG位點(diǎn)完全甲基化而Ea以及DHRS4的第一個(gè)外顯子前的CpG島則處于非甲基化狀態(tài)，提示DHRS4L2的轉(zhuǎn)錄可能受CpG島甲基化的調(diào)節(jié)。本研究鑒定正常肝細(xì)胞HL-7702和肝癌細(xì)胞Hep-G2 DHRS4L2的選擇性剪接新亞型，并探討其表達(dá)調(diào)控機(jī)制與甲基化的關(guān)系。
　　 控相關(guān), 因DHRS4L2第一外顯子啟動(dòng)子區(qū)域甲基化程度高，出現(xiàn)選擇性第一外顯子Ea表達(dá)的現(xiàn)象。去甲基化處理后，含有外