DTA基因表達載體對人乳腺癌細胞的選擇性表達和殺傷作用.pdf

1、白喉毒素(Diphtheriatoxin，DT) 是白喉棒狀桿菌產(chǎn)的細菌外毒素,使機體發(fā)生嚴重中毒反應。它是由535個氨基酸組成，分子量為58000的單鏈多肽，在胰蛋白酶的作用下,可降解為A(193個氨基酸)和B(342個氨基酸) 兩個片段。A 片段分子量為21000具有ADP依賴的核糖?；富钚?，B 片段由穿膜區(qū)和受體結合區(qū)組成,分子量為37000。A片段核糖體依賴的酶活性的發(fā)揮，必須在B 片段的受體結合區(qū)與敏感細胞表面的特異受體結

2、合，通過內化攜帶A片段移位達到細胞漿才能完成。完整的毒素不顯毒性,這是因為活性點在催化區(qū)和穿膜區(qū)的交界處，活性點入口由18個殘基組成的襻CL2和穿膜區(qū)所遮蔽，EF-Ⅱ(Elongation factor-2，延長因子Ⅱ) 至活性點的通道被阻斷，所以完整的白喉毒素不顯毒性。當A片段進入胞漿才具有活性，A片段催化NAD+對EF-Ⅱ的單一氨基酸殘基發(fā)生磷酸腺苷核糖?；?Adenosinediphosphoribosylate，ADPR),因而

3、EF-Ⅱ取代NAD+中的尼克酰胺，結果形成無活性的ADPR-EF-Ⅱ，EF-Ⅱ使多肽鏈在核蛋白體上移位使氨基酸不斷接上，從而使肽鏈在核蛋白體上延伸。當EF-Ⅱ失去活性，肽鏈不能延長,細胞內蛋白質合成受阻,引起細胞功能損傷或變性壞死。DF3／MUC1抗原是一種高分子量的黏蛋白樣糖蛋白，在約80％的人乳腺癌中存在過度表達。研究顯示人乳腺腫瘤中MUC1抗原在RNA和蛋白質水平表達幾乎是乳腺正常組織和良性病變的三十倍。對于乳腺癌的基因治療，利用

4、白喉毒素A片段的特性，根據(jù)乳腺腫瘤細胞（DF3陽性）來構建重組載體，探討其選擇性表達在腫瘤細胞中達到靶向殺傷腫瘤細胞的研究具有重要意義。 本實驗研究新構建的含人乳癌DF3/MUC1啟動子轉錄調控序列的DTA重組表達載體PGL3-DF3-DTA對乳腺癌DF3陽性的腫瘤細胞的選擇性表達和殺傷作用。在實驗中將乳腺癌的兩種細胞株MCF-7和MDA-MB-231分別接種至不同組裸鼠背側皮下，7天后開始用重組的質粒進行活體內瘤內注射治療，腫