Th17細(xì)胞在胃癌患者中的檢測及其富集作用因素的初探.pdf

1、目的：
　　檢測胃癌患者癌組織和外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Th17相關(guān)細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)含量，分析Th17細(xì)胞及其相關(guān)因子在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用
　　方法：
　　1）66例胃癌患者，50例健康志愿者外周血和組織標(biāo)本均來自鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院，所有患者標(biāo)本的采集均記錄了就診時間、性別、年齡、病理組織分型等臨床病理資料，患者進入研究前無任何放

2、療、化療以及其他藥物干預(yù)；
　　2）分離外周血單個核細(xì)胞 PBMC(1×106/cells)，應(yīng)用PMA(50 ng/ml)+Ionomycin(1μg/ml)+Monensin(500 ng/ml)刺激培養(yǎng)6 h。提取RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用qRT-PCR方法檢測外周血PBMC中CD4+T細(xì)胞主要轉(zhuǎn)錄因子RORγt、T-bet以及相關(guān)細(xì)胞因子IL-17A、IL-21、IL-1β、IFN-γ mRNA的表達(dá)水平；
　　3

3、）提取患者腫瘤組織中的RNA，應(yīng)用qRT-PCR方法檢測Th細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞因子IFN-γ, IL-17, T-bet和RORγt的mRNA表達(dá)水平，并通過直線相關(guān)分析方法對組織和外周血中細(xì)胞因子表達(dá)水平進行相關(guān)性分析；
　　4）采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測胃癌患者血漿中IL-21和IL-1β水平。
　　結(jié)果：
　　1）與健康對照組比較，胃癌患者和胃癌轉(zhuǎn)移者外周血PBMC中Th17、Th1細(xì)胞相關(guān)的

4、轉(zhuǎn)錄因子RORγt與T-bet的表達(dá)均增高，但只有RORγt增高具有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)。
　　2）與健康對照組相比胃癌患者和胃癌轉(zhuǎn)移者組織中，RORγt與T-bet的mRNA表達(dá)水平均增高，有統(tǒng)計學(xué)意義，其中 RORγt增加更加明顯，且在轉(zhuǎn)移組與原發(fā)組之間具有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)；
　　3）與健康對照組比較，胃癌患者血漿 IL-17表達(dá)增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，但轉(zhuǎn)移組與原發(fā)組之間無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4）

5、腫瘤患者體內(nèi)TGF-β與IL-21mRNA與蛋白水平明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　5）IL-1β mRNA和蛋白水平呈高表達(dá)，與健康對照組之間有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)，在胃癌轉(zhuǎn)移組和未轉(zhuǎn)移組之間也具有顯著差異(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1）相對健康對照來說，胃癌和胃癌轉(zhuǎn)移患者PBMC與組織中Th17細(xì)胞及其相關(guān)的因子呈現(xiàn)高水平表達(dá)，Th17與胃癌的轉(zhuǎn)移具有一定的相關(guān)性；
　　2）