趨化因子CCL19對大腸癌增殖的作用.pdf

1、目的：研究CCL19對人大腸癌細(xì)胞增殖的影響
　　方法：構(gòu)建慢病毒LV5-CCL19轉(zhuǎn)染腸癌細(xì)胞株，獲得過表達(dá)CCL19腸癌細(xì)胞株SW1116-CCL19和SW480-CCL19。通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（CCK-8法）、流式細(xì)胞技術(shù)、軟瓊脂克隆形成試驗(yàn)，小鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)，分別檢測上調(diào)CCL19后對SW1116及SW480細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期的影響。免疫印跡檢測細(xì)胞內(nèi)以及胞漿內(nèi)，胞核內(nèi)β-catenin、cyclinD1表達(dá)。免疫組化檢測臨

2、床標(biāo)本中CCL19與β-catenin表達(dá)關(guān)系。
　　結(jié)果：實(shí)時(shí)定量PCR及免疫印跡法驗(yàn)證LV5-EF1a-Puro-CCL19慢病毒載體系統(tǒng)穩(wěn)定上調(diào)大腸癌細(xì)胞株SW1116及SW480的CCL19表達(dá)。增殖實(shí)驗(yàn)，軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)提示CCL19高表達(dá)后腫瘤細(xì)胞增殖能力相比陰性對照組及空白對照組受到抑制。流式細(xì)胞周期及凋亡檢測顯示上調(diào)CCL19后，將大腸癌細(xì)胞阻滯于G1期，抑制腫瘤細(xì)胞增殖。凋亡檢測結(jié)果顯示，上調(diào)CCL19后，腫瘤

3、細(xì)胞凋亡相比陰性對照增加。免疫印跡結(jié)果表明，CCL19過表達(dá)后細(xì)胞內(nèi)總β-catenin表達(dá)量下降。細(xì)胞胞漿內(nèi)β-catenin表達(dá)量無明顯變化，胞核內(nèi)β-catenin表達(dá)量相比陰性對照組明顯下降。裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，上調(diào)CCL19后，腫瘤生長較陰性對照組受到抑制。臨床標(biāo)本結(jié)果顯示，CCL19表達(dá)與β-catenin成負(fù)相關(guān)關(guān)系，CCL19高表達(dá)的病人相比CCL19低表達(dá)的病人腫瘤更小，浸潤層次更淺。
　　結(jié)論：研究證實(shí)，