載脂蛋白E缺失對(duì)小鼠視神經(jīng)脊髓炎體外模型NMDAR1、NMDAR2B表達(dá)的影響.pdf

1、目的：視神經(jīng)脊髓炎(NMO)是一類中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)自身免疫性炎性脫髓鞘疾病，主要累及脊髓及視神經(jīng)。水通道蛋白4自身抗體(AQP4-IgG)所介導(dǎo)的補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒性作用(CDC)被認(rèn)為在NMO致病機(jī)制中占據(jù)重要的地位，但發(fā)病機(jī)制的研究依然任重道遠(yuǎn):谷氨酸興奮毒性作用是否可參與NMO的發(fā)病目前尚有爭(zhēng)議;作為CNS的主要載脂蛋白載脂蛋白E(ApoE)缺失是否加劇NMO神經(jīng)缺損尚不清楚。本研究通過(guò)檢測(cè):(1) NMO體外模型N-甲基-D-

2、天冬氨酸受體(NMDAR，NR)表達(dá)量及培養(yǎng)液谷氨酸濃度(2) ApoE缺失的NMO體外模型(NMDAR，NR)表達(dá)量及培養(yǎng)液谷氨酸濃度。從而探討谷氨酸及其受體NMDAR、ApoE在NMO發(fā)病中的作用。
　　方法：①提純AQP4-IgG表達(dá)陽(yáng)性患者血漿中的IgG(NMO-IgG)，冷凍干燥后備用;②取7-14d大小的C57BL/6背景野生型(WT)小鼠及載脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠，斷頭取脊髓（脊髓切成300μm薄片）

3、體外培養(yǎng);取8-10W大小的C57BL/6背景wT型小鼠及ApoE-/-小鼠，斷頭分離視神經(jīng)體外培養(yǎng);③用提純的IgG及補(bǔ)體干預(yù)脊髓及視神經(jīng)片制成NMO組同時(shí)設(shè)無(wú)干預(yù)的對(duì)照組;④免疫組織熒光檢測(cè)脊髓、視神經(jīng)中AQP4、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)、NMDAR的NR1及NR2B亞單位表達(dá)情況;比色法檢測(cè)培養(yǎng)液中谷氨酸濃度;免疫蛋白印跡法(WB)檢測(cè)脊髓、視神經(jīng)的NR1、NR2B蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：①NMO-IgG及補(bǔ)體干預(yù)小鼠脊髓

4、及視神經(jīng)能夠誘導(dǎo)GFAP、AQP4表達(dá)相較于對(duì)照組明顯減少(P＜0.05);②NMO-IgG及補(bǔ)體干預(yù)脊髓和視神經(jīng)能夠?qū)е翹MDAR1、NMDAR2B免疫組織熒光平均積分光密度值明顯增多(P＜0.05)，WT型和ApoE-/-型NMO體外模型組小鼠脊髓和視神經(jīng)的NMDAR1免疫組織熒光平均積分光密度值之間差異不顯著(P＞0.05)，但ApoE-/-型NMO體外模型組NMDAR2B免疫組織熒光平均積分光密度值要顯著高于WT型NMO體外模型

5、組(P＜0.05);③WB半定量檢測(cè)NMDAR1、NMDAR2B蛋白水平發(fā)現(xiàn)模型組相較于對(duì)照組NMDAR1和NMDAR2B蛋白水平表達(dá)明顯增多(P＜0.05)，且ApoE-/-模型組NMDAR2B蛋白表達(dá)量相較于WT型模型組和對(duì)照組均顯著增多(P＜0.05)，但ApoE-/-模型組和WT型模型組之間NMDAR1蛋白水平無(wú)顯著差異性(P＞0.05);④各組之間培養(yǎng)液內(nèi)谷氨酸濃度無(wú)顯著差異性(P＞0.05)。
　　結(jié)論：①NMDAR受