產(chǎn)藏紅花酸的人工酵母細(xì)胞的構(gòu)建.pdf

1、為了實(shí)現(xiàn)微生物異源合成天然類(lèi)胡蘿卜素藏紅花酸，以一株產(chǎn)β-胡蘿卜素的釀酒酵母為底盤(pán)細(xì)胞，利用合成生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建人工酵母細(xì)胞。通過(guò)在染色體整合藏紅花酸生物合成關(guān)鍵酶β-胡蘿卜素羥化酶（CrtZ），并以質(zhì)粒的形式導(dǎo)入玉米黃質(zhì)裂解雙加氧酶（CCD）和醛脫氫酶（ALD）。由于酵母內(nèi)源含有醛脫氫酶，所以首先對(duì)8種來(lái)源CrtZ和4種CCD進(jìn)行組合表達(dá)并篩選，由歐文氏菌來(lái)源的CrtZ和藏紅花來(lái)源的CCD形成組合的菌株獲使得藏紅花的最高產(chǎn)量約為231μ

2、g/L。之后繼續(xù)對(duì)3種不同來(lái)源的ALD進(jìn)行篩選，來(lái)自集胞藻來(lái)源的ALD效果最好，使得藏紅花酸的產(chǎn)量提高了1.88倍（從231μg/L提高到434μg/L），最終篩選出了合成藏紅花酸最優(yōu)的基因來(lái)源。
　　為了提升藏紅花酸的產(chǎn)量，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)路徑的敲除及提高基因表達(dá)量進(jìn)一步提高前體玉米黃質(zhì)的產(chǎn)量。法尼基焦磷酸（FPP）作為合成萜烯類(lèi)天然產(chǎn)物的重要前體，通過(guò)敲除Lpp1和Dpp1基因，削減法尼基焦磷酸向法呢醇的轉(zhuǎn)化，為玉米黃質(zhì)的合成提供更多