版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領
文檔簡介
1、第一部分小鼠心臟cTnI基因時序表達規(guī)律及衰老小鼠心臟形態(tài)及功能
目的:
心肌肌鈣蛋白I(cTnI)是調(diào)控心臟舒縮功能的重要心肌纖維蛋白,其正常表達對心臟功能特別是舒張功能的維持至關(guān)重要。流行病學研究發(fā)現(xiàn)心臟舒張功能障礙在老年人群中較為常見,可能與老年人心臟中cTnI含量下降有關(guān)。因此本部分研究將闡明小鼠出生至衰老期cTnI基因轉(zhuǎn)錄表達的時序性規(guī)律,并對衰老期小鼠心臟形態(tài)及功能進行評測,為研究心臟舒張功能障礙奠定模型
2、基礎。
方法:
1、以近交系健康清潔級 c57小鼠為研究對象,時間點分別選取NB,2w,3m,10m及18m。獲取各組小鼠心臟組織進行如下檢測:western blot檢測cTnI與cTnT蛋白表達水平;Q-PCR檢測cTnI mRNA表達水平;
2、以3m和18m小鼠為研究對象,利用高頻超聲檢測其心臟功能:左室短軸切面測量小鼠心臟收縮功能,分別檢測IVS、LVID及LVPW,計算左室EF及FS值;四腔心切
3、面測量二尖瓣血流速度,評價E/A比值,IVRT及IVCT值;
3、取3m及18m小鼠心肌組織,利用透射電鏡及H&E染色分別對心肌超微結(jié)構(gòu)及大體心臟形態(tài)進行觀察。
結(jié)果:
1、3m小鼠心臟中 cTnI蛋白及 mRNA水平顯著高于新 NB、2w及18m;與10m間對比無顯著差異(NB,2w,18m vs.3m p<0.05;10m vs.3m p>0.05)。cTnT蛋白在各組間表達水平無顯著差異(p>0.05
4、);
2、IVS、LVID、LVPW、EF及FS值在3m及18m之間小鼠之間無顯著性差異(p>0.05)。而18m組小鼠IVRT較3m組小鼠顯著延長, E/A比值顯著降低,p<0.05;IVCT則在兩組間無顯著差異,p>0.05;
3、3m小鼠心臟超微結(jié)構(gòu)無明顯異常,18m小鼠心肌細胞Z線增粗、肌絲發(fā)生溶解及水樣變性、肌漿網(wǎng)擴大。兩組小鼠心臟大體形態(tài)未見顯著異常。
結(jié)論:
1、小鼠心臟中cTnI蛋
5、白及mRNA從新生表達開始升高,3m達高峰,18m表達回落;
2、衰老期小鼠存在心臟舒張功能障礙,而收縮功能無明顯改變;
3、衰老期小鼠心肌超微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯破壞。
第二部分衰老期小鼠心臟舒張功能障礙中cTnI基因低表達的表觀遺傳機理
目的:
第一部分研究發(fā)現(xiàn)衰老期小鼠心臟 cTnI蛋白及 mRNA水平均顯著降低,提示cTnI下降可能發(fā)生在其自身轉(zhuǎn)錄水平。DNA甲基化通過對基因CpG島及啟
6、動子CG位點的修飾調(diào)控基因表達,而組蛋白乙酰化通過對基因染色質(zhì)的動態(tài)調(diào)控而影響基因轉(zhuǎn)錄。因此本部分研究從DNA甲基化及組蛋白乙?;癁榍腥朦c,探討衰老期小鼠心臟cTnI降低的表觀遺傳學機理。
方法:
研究對象同前。獲取小鼠心臟組織進行如下檢測:
1、利用MSP及BSP檢測cTnI啟動子-1500bp左右CpG島及cTnI啟動子關(guān)鍵順式作用元件GATA及Mef2元件散在CG位點DNA甲基化水平;
2、
7、利用ChIP-PCR技術(shù)檢測cTnI啟動子關(guān)鍵順式作用元件區(qū)域組蛋白H3、H3K9、H3K27乙?;剑?br> 3、采用ChIP-PCR方法檢測與cTnI關(guān)鍵順式作用元件對應轉(zhuǎn)錄因子GATA4和Mef2c的結(jié)合水平。
結(jié)果:
1、各組小鼠cTnI啟動子上游CpG島和GATA&Mef2元件散在CG位點均存在DNA甲基化;但各組間cTnI基因 CpG島及啟動子關(guān)鍵元件散在CG位點DNA甲基化水平無顯著差異,p>0.
8、05;
2、3m組小鼠cTnI啟動子關(guān)鍵元件區(qū)域組蛋白H3及H3K9水平顯著高于NB、2w及18m組;與10m組間對比無顯著差異(NB,2w,18m vs.3m p<0.05;10m vs.3m p>0.05);3m組小鼠cTnI啟動子關(guān)鍵元件區(qū)域組蛋白H3K27乙?;斤@著高于NB及2w,與10m及18m間對比無顯著統(tǒng)計學差異( NB,2w vs.3m p<0.05;10m,18m vs.3m p>0.05);
9、3、3m組小鼠心臟中GATA4和Mef2c與cTnI啟動子GATA&Mef2元件結(jié)合水平顯著高于NB、2w及18m組;與10m組間對比無顯著差異(NB,2w,18m vs.3m p<0.05;10m vs.3m p>0.05)。
結(jié)論:
1、DNA甲基化可能并未參與cTnI基因時序性表達;
2、衰老期小鼠心臟cTnI啟動子關(guān)鍵元件區(qū)域組蛋白H3K9乙?;斤@著降低,轉(zhuǎn)錄因子 GATA4及 Mef2c與之結(jié)
10、合水平亦降低,提示cTnI啟動子關(guān)鍵元件區(qū)域組蛋白H3乙酰化可能參與調(diào)控cTnI時序性表達。
第三部分 EGCG上調(diào)cTnI基因表達改善衰老期小鼠心臟舒張功能
目的:
第二部分研究發(fā)現(xiàn)cTnI啟動子區(qū)域組蛋白低乙?;赡苁且鹚ダ掀谛∈骳TnI低表達的機理之一,近期研究發(fā)現(xiàn)EGCG(兒茶素)能上調(diào)組蛋白H3K9乙?;剑虼吮静糠謱嶒炦x擇EGCG作為干預劑,明確體內(nèi)水平EGCG干預對老年小鼠心臟cTnI表
11、達及心臟舒張功能的影響,并探討其內(nèi)在機理。
方法:
以16m老年期小鼠為研究對象,將其隨機分為空白對照組(16m)、16m+DMSO組、16m+EGCG組,給予16m小鼠EGCG處理,50mg/kg/d,腹腔注射,連續(xù)處理8周,待小鼠18m時停止干預,以3m小鼠為對照進行如下檢測:
1、采用高頻超聲評價18m+EGCG小鼠心臟功能,與3m及18m組小鼠進行比對;
2、利用Western blot及
12、Q-PCR檢測各組小鼠心臟中cTnI蛋白及mRNA表達水平;檢測各組心肌組織中HDAC1、HDAC2及HDAC3 mRNA表達水平;
3、利用ChIP技術(shù)檢測cTnI啟動子GATA&Mef2元件區(qū)域組蛋白H3K9乙酰化水平,HDAC1、HDAC2、HDAC3與關(guān)鍵元件結(jié)合水平,轉(zhuǎn)錄因子GATA4、Mef2c與cTnI啟動子關(guān)鍵元件結(jié)合水平。
結(jié)果:
1、18m+EGCG組小鼠心臟IVTR較18m組顯著降低,
13、E/A比值則顯著升高(p<0.05),但與3m組無顯著性差異(p>0.05);
2、18m+EGCG組小鼠心臟cTnI mRNA和蛋白表達量較18m及18m+DMSO組顯著增加(p<0.05),與3m組間無顯著差異(p>0.05);
3、18m及18m+DMSO組HDAC1及HDAC3 mRNA水平顯著低于18m+EGCG及3m組(p<0.05),而 HDCA2 mRNA水平在各組間無顯著差異(p>0.05);
14、> 4、18m+EGCG組小鼠cTnI啟動子關(guān)鍵元件區(qū)域組蛋白H3K9乙?;礁哂?8m及18m+DMSO組(p<0.05),與3m組間無統(tǒng)計學差異(p>0.05);
5、18m+EGCG組及3m組HDAC1與cTnI啟動子結(jié)合關(guān)鍵元件結(jié)合水平顯著低于18m及18m+DMSO組(p<0.05),而HDAC2及HDAC3與cTnI啟動子結(jié)合水平在各組間無顯著差異(p>0.05);
6、GATA4和 Mef2c與 c
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 兒茶素對心臟舒張功能障礙小鼠的實驗性治療.pdf
- EGCG上調(diào)老年相關(guān)SERCA2a低表達的表觀遺傳機理研究.pdf
- 電針對輕度認知功能障礙的干預研究.pdf
- 化瘀復元膠囊干預高血壓病左心室舒張功能障礙的臨床觀察.pdf
- 帕金森病認知功能障礙及相關(guān)遺傳因素研究.pdf
- 老年輕度認知功能障礙的早期干預及管理對策研究.pdf
- 帕金森病認知功能障礙及遺傳易感性研究.pdf
- 神經(jīng)內(nèi)分泌拮抗劑對冠心病左心室舒張功能障礙患者的干預研究.pdf
- 在自噬功能障礙情況下Nrf2調(diào)節(jié)失代償性心臟重構(gòu)及功能障礙的機制研究.pdf
- bdnf基因轉(zhuǎn)錄的表觀遺傳調(diào)控在電離輻射所致神經(jīng)發(fā)生損傷及認知功能障礙過程中的作用研究.pdf
- 人工心臟瓣膜功能障礙超聲回顧分析.pdf
- 積極心理干預對帕金森患者抑郁及認知功能障礙影響的研究.pdf
- 線粒體功能障礙在慢性腎功能衰竭腎小管間質(zhì)纖維化中的作用及干預研究.pdf
- B型利鈉肽和左室舒張功能障礙關(guān)系的研究.pdf
- 益腎舒心丸改善冠心病左室舒張功能障礙的臨床研究.pdf
- 慢性氟中毒所致大鼠認知功能障礙的機理研究.pdf
- 表觀遺傳的生化機理及應用前景
- 慢性間斷性缺氧導致的線粒體功能障礙及藥物干預.pdf
- 人精子發(fā)生與運動功能障礙的遺傳機制研究.pdf
- 宮頸癌患者術(shù)后盆底功能障礙調(diào)查及相關(guān)干預研究.pdf
評論
0/150
提交評論