Piwil2重編程人成纖維細(xì)胞腫瘤組織學(xué)特征及Piwil2-Piwil4蛋白與肝細(xì)胞癌預(yù)后的相關(guān)性.pdf

1、目的：
　　觀察Piwi家族成員Piwil2重編程人包皮成纖維細(xì)胞獲得的腫瘤干細(xì)胞（Piwil2-iCSC）體內(nèi)成瘤組織的組織學(xué)特征。探究Piwil2/Piwil4蛋白與肝細(xì)胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC)預(yù)后的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.挑選Piwil2-iCSC腫瘤球樣克隆細(xì)胞進(jìn)行裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)，組織學(xué)觀察Piwil2-iCSC腫瘤組織病理特點(diǎn)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）

2、和免疫組化法檢測(cè)Piwil2-iCSC腫瘤組織中干細(xì)胞標(biāo)志物和常見三胚層腫瘤標(biāo)志物，免疫組化法檢測(cè)Piwil2-iCSC腫瘤組織中生殖細(xì)胞腫瘤標(biāo)志物。
　　2.免疫熒光雙標(biāo)方法檢測(cè)Piwil2及Piwil4蛋白在附有隨訪信息的肝細(xì)胞癌組織芯片中表達(dá)情況，探究單一標(biāo)志物Piwil2、Piwil4及分子伴侶Piwil2/Piwil4在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)定位差異對(duì)肝細(xì)胞癌遠(yuǎn)期生存率的影響。
　　結(jié)果：
　　1.接種2周時(shí)，裸鼠體

3、內(nèi)皮下100％形成腫瘤。Piwil2-iCSC腫瘤組織DAPI染色顯示，Piwil2-GFP標(biāo)記定位細(xì)胞核，且滿視野高密度表達(dá)。HE染色顯示，腫瘤細(xì)胞核分裂象高，每高倍鏡下＞10個(gè)核分裂象，核增大畸形。
　　2.RT-PCR檢測(cè)顯示，Piwil2-iCSC腫瘤組織仍高表達(dá)Piwil2、部分干細(xì)胞自我更新標(biāo)志物和三胚層特征標(biāo)志物。免疫組化染色顯示，Piwil2-iCSC腫瘤組織表達(dá)相關(guān)干細(xì)胞標(biāo)志物、三胚層多種腫瘤標(biāo)志物和生殖細(xì)胞腫瘤

4、標(biāo)志物AFP、HCG。
　　3.肝細(xì)胞癌組織芯片免疫熒光雙標(biāo)檢測(cè)顯示：Piwil2以胞核表達(dá)為主，胞核表達(dá)強(qiáng)度高于胞漿；Piwil4胞核胞漿表達(dá)程度接近，胞漿表達(dá)強(qiáng)度高于胞核。
　　4分子伴侶Piwil2/Piwil4在肝細(xì)胞癌共表達(dá)定位有四種規(guī)律，包括胞核共表達(dá)(Piwil2+/-Piwil4+/+、Piwil2+/-Piwil4+/-）、胞核胞漿共表達(dá)(Piwil2+/+Piwil4+/+)、胞漿共表達(dá)(Piwil2+/

5、+Piwil4-/+)、無共表達(dá)部位(Piwil2+/-Piwil4-/-、Piwil2+/-Piwil4-/+、Piwil2+/+Piwil4-/-)，患者生存率、總生存期依次遞增。
　　5生存期分析顯示，Piwil2/Piwil4胞核共表達(dá)者預(yù)后表型明顯差于無共表達(dá)部位者（P=0.034），單一標(biāo)志物Piwil2、Piwil4細(xì)胞內(nèi)表達(dá)定位差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.Piwil2-iCSC腫瘤可能為胚