液泡膜ATP酶亞基通過(guò)使巨噬細(xì)胞極化調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為.pdf

1、目的：探討液泡膜ATP酶亞基的N末端結(jié)構(gòu)域（a2NTD）在調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化方面的作用，以及極化的巨噬細(xì)胞對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法：利用Ficoll密度梯度離心法分離提取健康人外周血中單個(gè)核細(xì)胞，誘導(dǎo)培養(yǎng)巨噬細(xì)胞后分為4組：M-CSF組（rhM-CSF100ng/mL+RPMI1640），a2NTD組（rha2NTD500ng/mL+RPMI1640），a2NTD+M-CSF組（rha2NTD500 ng/mL+rhM

2、-CSF100ng/mL+RPMI1640）和對(duì)照組(僅RPMI1640)，刺激48h后以雙重免疫熒光標(biāo)記法檢測(cè)巨噬細(xì)胞膜表面抗原的表達(dá)，以ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子IL-10和IL-12的分泌情況。通過(guò)transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)將a2NTD組（rha2NTD500ng/mL+ RPMI1640），對(duì)照組（僅RPMI1640），空白組（不接種細(xì)胞）和胃癌細(xì)胞SGC-7901共培養(yǎng)，用CCK-8法檢測(cè)巨噬細(xì)胞對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖

3、能力的影響，Hoechst染色檢測(cè)胃癌SGC-7901細(xì)胞的凋亡情況，transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌SGC-7901細(xì)胞的侵襲力。
　　結(jié)果：CD68在4組巨噬細(xì)胞的細(xì)胞膜上均有表達(dá)（＋），平均吸光度值（MD值）分別為：對(duì)照組0.092±0.005，M-CSF組0.095±0.006，a2NTD組0.094±0.005，a2NTD+M-CSF組0.094±0.005，兩兩比較，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。CD206在對(duì)照

4、組弱表達(dá)（－），MD值為：0.025±0.004；在M-CSF組和a2NTD組均有表達(dá)（＋），MD值分別為：0.191±0.012和0.197±0.136；在a2NTD+M-CSF組超強(qiáng)表達(dá)（＋＋＋），MD值為：0.285±0.011。除M-CSF組和a2NTD組差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），其余各組兩兩比較，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P<0.01）。M-CSF組和a2NTD組細(xì)胞分泌IL-10水平分別為（85.65±13.64）ng

5、/L和（87.77±14.25）ng/L均高于對(duì)照組[（71.67±7.56）ng/L，P<0.01]，分泌Il-12水平分別為均（9.91±1.50）ng/L和（10.15±1.80）ng/L均低于對(duì)照組[（16.87±1.10）ng/L，P<0.01]；a2NTD+M-CSF組分泌IL-10水平為（116.98±14.27）ng/L，高于其余各組（均P<0.01），分泌IL-12水平（5.31±0.88）ng/L，低于其余各組（均P

6、<0.01）。各組巨噬細(xì)胞對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞的增殖均有促進(jìn)作用，且a2NTD組巨噬細(xì)胞對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞的增殖速度的促進(jìn)作用明顯強(qiáng)于空白組和對(duì)照組（均 P<0.001)。胃癌SGC-7901細(xì)胞的凋亡率在各組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)，且a2NTD組胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡率明顯低于對(duì)照組和空白組(均 P<0.01)。各組間相對(duì)穿膜細(xì)胞數(shù)比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.001)，且空白組和對(duì)照組胃癌細(xì)