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文檔簡介
1、目的:骨骼系統(tǒng)中存在的流體剪切力能夠強(qiáng)有力地促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖。我們之前報(bào)道過Extracellular signal-regulated kinase5(ERK5)在流體剪切力誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖中發(fā)揮重要作用。然而流體剪切力通過激活ERK5信號通路促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖的具體機(jī)制的報(bào)道還很匱乏。本篇實(shí)驗(yàn)的目的是為了研究Gαq在流體剪切力誘導(dǎo)的ERK5激活和成骨細(xì)胞增殖中發(fā)揮的作用和Gαq-ERK5信號通路的下游靶點(diǎn)。
方法:成骨MC
2、3T3-E1細(xì)胞給予轉(zhuǎn)染50 nM Gαq siRNA,孵育5μM XMD8-92(一種高選擇性ERK5活性抑制劑),和/或加載12 dyn/cm2流體剪切力處理,采用 MTT實(shí)驗(yàn)檢測成骨細(xì)胞的增殖活性,采用蛋白免疫印記實(shí)驗(yàn)檢測 Gαq、P-ERK5、ERK5、Cyclin B1和CDK1蛋白的表達(dá)水平。
結(jié)果:生理強(qiáng)度的流體剪切力作用于成骨MC3T3-E1細(xì)胞60 min后能顯著促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖。但是,成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染 Gαq
3、siRNA敲除 Gαq基因或孵育XMD8-92抑制ERK5活性后,流體剪切力誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖活性明顯降低。說明流體剪切力誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖受到Gαq和ERK5信號通路的調(diào)控。而且成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染Gαq siRNA后,ERK5活性明顯下降。此外,流體剪切力可顯著上調(diào)成骨細(xì)胞中Cyclin B1和CDK1表達(dá)水平,而此生理效應(yīng)可被Gαq siRNA或XMD8-92顯著抑制。
結(jié)論:流體剪切力通過Gαq-ERK5信號通路上調(diào)Cycli
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