SPHK1作為鼻咽癌預(yù)后因子及潛在治療靶點(diǎn)的研究.pdf

1、研究目的:鞘脂類的代謝產(chǎn)物如神經(jīng)酰胺(Cer)、鞘氨醇(Sph)、1磷酸鞘氨醇(S1P)等，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，而鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase1，SPHK1)是調(diào)節(jié)鞘脂類平衡的關(guān)鍵酶。研究表明SPHK1在多種實(shí)體瘤中高表達(dá)，通過SPHK1/S1P途徑促進(jìn)腫瘤進(jìn)展、影響預(yù)后。FTY720（芬戈莫德）是鞘氨醇的類似物，具有很強(qiáng)的免疫抑制活性。最近研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TY720可以抑制某些腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)凋亡

2、。本實(shí)驗(yàn)探討SPHK1在鼻咽癌中的表達(dá)及其與患者分期分級及預(yù)后的關(guān)系，以及SPHK1作為鼻咽癌潛在治療靶點(diǎn)的可能性。
　　研究方法:運(yùn)用qRT-PCR，Western blot技術(shù)檢測SPHK1 mRNA和蛋白在新鮮鼻咽癌組織與鼻咽部炎癥組織中的表達(dá)情況;石蠟切片免疫組化檢測142鼻咽癌組織和10例鼻咽部炎癥組織中SPHK1的表達(dá)，并進(jìn)行評分，運(yùn)用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)分析SPHK1表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，鼻咽癌

3、細(xì)胞株CNE1和CNE2中轉(zhuǎn)染siRNA，運(yùn)用qRT-PCR，Western blot檢測siRNA轉(zhuǎn)染后SPHK1的表達(dá);運(yùn)用CCK-8法檢測干擾SPHK1對細(xì)胞增殖的影響及FTY720對細(xì)胞活性和放療敏感性的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測干擾SPHK1和FTY720對細(xì)胞周期及凋亡的影響;運(yùn)用SPHK1活性檢測ELISA試劑盒檢測FTY720對SPHK1酶活性的影響。
　　研究結(jié)果:qRT-PCR和Western blot檢測表明SPH

4、K1在新鮮鼻咽癌組織中的表達(dá)高于炎癥組織。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)142例鼻咽癌中93例(65.5％)SPHK1高表達(dá)，10例非腫瘤性組織中，SPHK1低表達(dá)或不表達(dá)。卡方檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SPHK1高表達(dá)與臨床分期(P=0.001)、T分期(P=0.029)，N分期(P=0.002)、局部復(fù)發(fā)（P=0.018）和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.001)相關(guān)。Kaplan-Meier生存分析和Log-rank檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)SPHK1高表達(dá)鼻咽癌患者較低表達(dá)者生存時(shí)間短(

5、P＜0.001)。多因素方差分析表明SPHK1是鼻咽癌患者獨(dú)立的預(yù)后因子(P＜0.05)。鼻咽癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siRNA后，qRT-PCR和WB檢測轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中SPHK1 mRNA和蛋白表達(dá)均降低。鼻咽癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染si-SPHK1后抑制細(xì)胞增殖，阻滯細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡（均P＜0.05）。FTY720可以抑制SPHK1酶的活性，抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)凋亡，增強(qiáng)細(xì)胞對放療的敏感性。
　　研究結(jié)論:我們的研究結(jié)果表明SPHK1在鼻咽癌