人類蛋白(SSX2IP與14-3-3-ITPKC與PPP3CC)相互作用及功能的初步研究.pdf

1、本論文分為兩個部分,第一部分是關(guān)于SSX2IP與14-3-3家族之間的相互作用及功能研究。第二部分是關(guān)于ITPKC和PPP3CC之間的相互作用及功能研究。
　　在論文的第一部分中,我們首先以SSX2IP作為誘餌蛋白對成人肝cDNA文庫進行酵母雙雜交篩選,結(jié)果篩選到了SSX2IP的一個新相互作用蛋白14-3-3η。利用GSTPull-down實驗和哺乳動物細胞內(nèi)免疫共沉淀實驗驗證了SSX2IP與14-3-3η之間相互作用的真實性。免

2、疫熒光共定位實驗發(fā)現(xiàn),當(dāng)單獨轉(zhuǎn)染SSX2IP時,它在細胞質(zhì)和細胞核內(nèi)均有表達,且在細胞核內(nèi)的表達多于細胞質(zhì);當(dāng)與14-3-3η共轉(zhuǎn)染時,SSX2IP在細胞質(zhì)的表達量增加,可以與14-3-3η共定位于細胞質(zhì)中。利用CCK-8法檢測SSX2IP和14-3-3η對于HEK293T細胞增殖的影響,發(fā)現(xiàn)共轉(zhuǎn)染SSX2IP和14-3-3η后,細胞的生長速度比分別單獨轉(zhuǎn)染SSX2IP或14-3-3η時均有所提高,推測SSX2IP和14-3-3η的相互

3、作用可在一定程度上促進細胞的增殖。
　　14-3-3是一類在真核生物細胞中普遍存在并高度保守的蛋白質(zhì)家族。脊椎動物中,14-3-3蛋白共包括有七種亞型,14-3-3η就是其中之一。利用相同的方法檢測14-3-3家族其它6個成員與SSX2IP之間是否存在相互作用關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn),14-3-3家族中共有4個成員與SSX2IP之間有相互作用,而其余3個成員與SSX2IP不存在相互作用。
　　在論文的第二部分中,我們以ITPKC為誘餌

4、蛋白對成人肝cDNA文庫進行酵母雙雜交篩選,結(jié)果篩選到了其相互作用蛋白——PPP3CC。利用免疫共沉淀實驗,我們在外源過表達水平上驗證了ITPKC和PPP3CC之間的相互作用關(guān)系。免疫熒光共定位實驗發(fā)現(xiàn),ITPKC可與PPP3CC共定位于細胞質(zhì)中。當(dāng)ITPKC和PPP3CC共轉(zhuǎn)染細胞時,隨著PPP3CC表達量的增加,ITPKC的表達量也呈上升趨勢,推測PPP3CC的過表達可以對細胞中ITPKC的表達量產(chǎn)生影響。ITPKC是川崎病易感基因