STAT3與Sorcin相互作用研究.pdf

1、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)家族已發(fā)現(xiàn)七個(gè)成員，作為轉(zhuǎn)錄因子，多種細(xì)胞因子、激素以及生長(zhǎng)因子可通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)影響其活性，從而調(diào)控下游靶基因表達(dá)，影響和改變細(xì)胞功能，如細(xì)胞增殖、分化、凋亡、轉(zhuǎn)化，已知道其與免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、腫瘤密切相關(guān)。在這7個(gè)成員中，STAT3被研究得最多，且基因敲除研究發(fā)現(xiàn)，它是該家族成員中敲除后唯一引起胚胎致死的基因，說(shuō)明該基因在個(gè)體形成和發(fā)育中有重要的作用。正因?yàn)槠渲匾?，所以?duì)它的研究方興未艾，尤其什么蛋白

2、與其相互作用而調(diào)控其轉(zhuǎn)錄活性，是研究中的一個(gè)熱點(diǎn)，為此，我們利用酵母雙雜交技術(shù)，以STAT3為誘餌，篩選成人肝臟文庫(kù)中與其相互作用的蛋白，結(jié)果我們篩到了新的獵物Sorcin。 有關(guān)Sorcin研究不多，已知它是一種可溶性戊-EF手型的Ca2結(jié)合蛋白，分子量大小為22kDa，最初被發(fā)現(xiàn)于多藥耐受性的細(xì)胞中，可能與耐藥相關(guān)；另外，報(bào)道顯示Sorcin與多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤、乳腺癌等癌癥相關(guān)聯(lián)。 因?yàn)橛袌?bào)道STAT3與腫瘤

3、和耐藥也相關(guān)，所以我們繼續(xù)深入研究二者是否相互作用。結(jié)果我們通過(guò)PCR成功擴(kuò)增出Sorcin基因，成功構(gòu)建了帶Myc標(biāo)簽的Sorcin表達(dá)載體、帶GST標(biāo)簽和Flag標(biāo)簽的STAT3載體，Western-blot檢測(cè)三者都表達(dá)，然后通過(guò)GST-pulldown實(shí)驗(yàn)和Co-IP實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明了STAT3和Sorcin的相互作用，最后，我們利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)研究發(fā)現(xiàn)Sorcin對(duì)STAT3的轉(zhuǎn)錄活性有調(diào)節(jié)作用，并且這種上調(diào)作用具有劑量