可溶性RAGE及XAV-939通過RAGE-Wnt-β-catenin信號通路抑制db-db小鼠動脈鈣化.pdf

1、目的：探討不同濃度的可溶性RAGE（sRAGE）及XAV-939對db/db小鼠動脈鈣化程度及相關成骨蛋白表達的影響；通過體內實驗進一步了解RAGE蛋白與Wnt/β-catenin信號通路的關系。方法：（1）將購買的8周db/db小鼠飼養(yǎng)在SPF室，飼養(yǎng)1周后隨機分為對照組、sRAGE組、XAV-939組、sRAGE+XAV-939組，每只小鼠均予以高脂飲食（HFD）飼養(yǎng)；（2）對照組予以腹腔注射100ul生理鹽水（NS）；可溶性RAG

2、E組（即sRAGE組）分為兩組，即低劑量組和高劑量組，低劑量組予以0.5ug sRAGE和高劑量組予以2ug sRAGE行腹腔注射；XAV-939組同樣分為兩組，即低劑量組0.1mg XAV-939和高劑量組0.4mg XAV-939腹腔注射；可溶性RAGE+XAV-939組（即sRAGE+XAV-939組）予以2ug sRAGE+0.4mg XAV-939腹腔注射；（3）在實驗前1天及實驗中的第7、14、21、28天時分別稱取每只小鼠

3、的體重及同期采用血糖儀測量其隨機血糖，并記錄，第28天采用脫頸處死小鼠后，立即使用剪刀打開小鼠的胸腔，并使用1ml空針行心臟抽血，離心后取上清液，分裝于EP管中，保存于-20℃冰箱備用，并分離主動脈行鈣化及相關成骨蛋白表達的檢測；（4）采用ELISA測血漿中AGEs的含量，對大體主動脈行Von Kossa染色及鈣含量測定，并對部分主動脈做成石蠟切片，行切片彈性纖維染色以及免疫組化；（5）利用蛋白印跡技術檢測主動脈中β-catenin及鈣

4、化相關蛋白Runx2、BMP-2、OPG的表達。結果：（1）在小鼠體內運用sRAGE或XAV-939后，可以降低其動脈鈣化、鈣含量及膠原蛋白的表達，并保持彈性纖維的完整性；（2）可溶性RAGE可以通過減弱β-catenin的表達，從而抑制Wnt通路，并下調相關成骨蛋白Runx2、BMP-2的表達，并呈劑量依賴。結論：在糖尿病小鼠體內運用抑制劑sRAGE或XAV-939后，可通過調控β-catenin的轉錄活性，下調BMP-2、Runx2