TLR5和NLRC4通路對乳腺癌細胞增殖和部分免疫細胞的影響.pdf

1、目的:通過重組鞭毛素蛋白探究TLR5和NLRC4通路在抑制人乳腺癌細胞增殖中的作用及其對小鼠中性粒、NK細胞、DC和Treg細胞的影響。
　　方法：試驗中用到四種重組鞭毛素蛋白：FliC（激活TLR5和 NLRC4），F(xiàn)liCΔ90-97(激活NLRC4)，F(xiàn)liC-L3A（激活TLR5），F(xiàn)liCΔ90-97:L3A（不激活TLR5和NLRC4）。
　　1.IPTG誘導表達和鎳離子親和層析法純化重組沙門氏菌鞭毛素蛋白，通過

2、檢測IL-8和IL-1β檢驗重組鞭毛素蛋白激活TLR5和 NLRC4的生物學活性。
　　2.qRT-PCR法檢測乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231細胞中TLR5和NLRC4的表達；采用CCK8法和克隆形成實驗檢測重組鞭毛素蛋白對乳腺癌細胞增殖的影響，Western-blot檢測NF-κB(TLR5)和P10(NLRC4)通路激活情況。
　　3.流式細胞術檢測小鼠中性粒細胞，NK細胞，DC和Treg的比例及表面分子。<

3、br>　　結果：
　　1.重組鞭毛素蛋白的純度>95％，內毒素殘留<0.01EU/mg蛋白，重組鞭毛素蛋白具有生物學活性。
　　2.重組鞭毛素蛋白對MCF-7和MDA-MB-231細胞有抑制作用，在0.1μg/ml時，MCF-7細胞各組抑制率>20%。Western-blot結果顯示，在MCF-7細胞FliC和FliC-L3A組胞核蛋白中NF-κB高于對照組，F(xiàn)liC和FliCΔ90-97組檢測到caspase1 P10片段

4、。
　　3.流式結果顯示FliC、FliCΔ90-97和FliC-L3A使腹腔中性粒細胞和NK細胞比例增加，分別為（8.41±0.04）%和(9.9±2.6)%；（9.1±2.1）%和（10.3±0.3）%；（8.0±0.3）%和（11.0±2.6）%，PBS組為（2.6±1.3）%和(3.2±0.2)%。FliC和FliC-L3A組DC細胞上CD80和CD86表達上調與對照組相比有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。FliC-L3A組調