NGAL、KIM-1、TIMP-2早期診斷膿毒癥大鼠急性腎損傷的實驗研究.pdf

1、實驗一膿毒癥大鼠急性腎損傷模型制備
　　目的：制備一種簡單、相對穩(wěn)定的大鼠膿毒癥急性腎損傷模型。
　　方法：利用盲腸結扎穿孔術制備膿毒癥大鼠急性腎損傷模型。健康清潔級雄性SD大鼠50只隨機分為3組，①正常對照組（n=10）:不做任何處理;②盲腸結扎穿孔組（CLP組，n=20）:參照Rittirsch等的方法進行盲腸結扎穿孔術。③假手術組（sham組，n=20）:除了不進行盲腸結扎穿孔外，其余操作同CLP組。24h后經心臟穿刺

2、留取血檢測血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平，取腎組織標本行蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察腎組織病理改變，sham組、CLP組各留10只大鼠觀察生物學行為變化及24h、48h的死亡率。根據(jù)肌酐及腎臟病理改變判斷膿毒癥大鼠是否出現(xiàn)急性腎損傷。計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：s

3、ham組大鼠麻醉清醒后，活動正常，大鼠全部存活，CLP組大鼠清醒后活動減少，精神差，24h死亡率為20％，48h死亡率為60％。sham組與正常對照組相比，各指標之間沒有顯著性差異（P＞0.05）;與sham組相比，CLP組大鼠24h時血Cr、BUN、TNF-α、IL-6的表達明顯增高(Cr(μmol/L):17.74±1.80比40.96±3.03，BUN(nmol/L):1.35±0.23比2.59±0.28, TNF-α(ng/L

4、):100.81±7.97比239.30±17.57, IL-6(ng/L):76.35±8.94比161.43±14.76，均P＜0.05)。正常對照組與sham組大鼠腎臟組織結構清晰，未見明顯病理改變，腎損傷評分無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）;與sham組比較，CLP組腎組織結構紊亂，可見腎小管上皮細胞腫脹、空泡變性、細胞脫落等變化，損傷程度加重，腎損傷病理評分升高，差異有統(tǒng)計學意義（0.48±0.25比2.83±0.27，P＜0.0

5、5）。
　　結論：1.本實驗的膿毒癥致AKI大鼠模型制備成功。2.通過控制實驗動物的品種、年齡及盲腸結扎穿孔術的標準化，可制備簡單穩(wěn)定的膿毒癥大鼠急性腎損傷模型。
　　實驗二 NGAL、KIM-1、TIMP-2對膿毒癥大鼠AKI的早期預測價值
　　目的：探討NGAL、KIM-1、TIMP-2對膿毒癥大鼠AKI中的早期預測價值。
　　方法：健康清潔級雄性SD大鼠108只，隨機分為三組，正常對照組(n=12);膿毒癥

6、AKI組（SAKI組，n=48），行盲腸結扎穿孔術;假手術組(sham組，n=48)，除了不進行盲腸結扎穿孔外，其余操作同SAKI組。SAKI組、sham組均在制模后設置6h、12h、18h、24h四個時間點，每組每個時間點12只大鼠;各時間點心臟穿刺取血檢測血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平;膀胱穿刺留取尿液，檢測尿NGAL、尿KIM-1、尿TIMP-2水平，光鏡下觀察腎組織病理改變。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，多組間比

7、較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義;部分數(shù)據(jù)采用Pearson方法進行相關性分析。
　　結果：
　　1.各組腎功能變化比較
　　sham組各時間點血肌酐值、尿素氮值與正常對照組相比無顯著性差異(P＞0.05);SAKI組術后6h與sham組相比無顯著性差異(P＞0.05);SAKI組術后12h血肌酐值、尿素氮值明顯升高，與sham組相比有顯著性差異（P＜0.05），SAKI組血

8、肌酐值、尿素氮值于24h達峰值，SCr(μmol/L):41.75±4.12，BUN(nmol/L):2.51±0.39，術后12h、18h與24h比較有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。
　　2.各組大鼠尿腎損傷標志物的變化比較
　　sham組各時間點尿KIM-1、NGAL、TIMP-2與正常對照組相比，無顯著性差異（P＞0.05）;SAKI組術后6h尿KIM-1、NGAL、TIMP-2即升高，與sham組相比有顯著性差異（均P

9、＜0.05）;尿KIM-1術后12h達高峰(130.08±10.53(ng/L))，術后18h、24h有所下降，仍高于sham組(P＜0.05)，術后6h、12h、18h、24h與正常對照組比較有顯著性差異(P＜0.05);尿NGAL于CLP術后18h達高峰(2979.21±258.91(ng/L))，術后24h有下降趨勢，仍高于sham組(P＜0.05)，術后各時間點與正常對照組比較有顯著性差異（均P＜0.05）;尿TIMP-2在CL

10、P術后12h、18h、24h繼續(xù)升高，24h達高峰(2241.59±226.45(ng/L))，術后各時間點與正常對照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。
　　3.各組大鼠腎臟組織病理改變及腎損傷病理評分
　　sham組和正常對照組大鼠的腎臟組織結構未見明顯異常;腎小管上皮細胞未見水腫、空泡變性、壞死、脫落，腎小管內未見管型形成等改變;SAKI組大鼠腎臟組織結構有所改變，可見腎小管上皮細胞腫脹、空泡變性、脫落，腎小管內有管型

11、形成。
　　sham組各時間點腎臟組織損傷評分與正常對照組相比，無顯著性差異(P＞0.05);SAKI組腎損傷病理評分在術后各時間點均升高，隨術后時間延長腎組織損傷程度逐漸加重，與sham組相比有顯著性差異(6h:0.38±0.18比1.03±0.17，12h:0.43±0.24比1.77±0.17，18h:0.42±0.22比2.24±0.28,24h:0.47±0.32比2.89±0.20;均P＜0.05)。
　　4.尿

12、標志物與腎損傷評分相關性分析
　　尿KIM-1、尿NGAL、尿TIMP-2與大鼠腎損傷病理評分成正相關，相關系數(shù)分別為0.638、0.897、0.810，（均P＜0.01），SCr、BUN與大鼠腎損傷病理評分相關性分析顯示:相關系數(shù)分別為0.795、0.638，（均P＜0.01）。
　　結論:膿毒癥AKI大鼠在CLP術后6h各尿標志物即明顯升高，且早于血肌酐、血尿素氮，尿KIM-1、尿NGAL、尿TIMP-2與膿毒癥大鼠腎損