Let-7對wnt信號通路的表達(dá)調(diào)控研究.pdf

1、渦蟲是扁形動物門、渦蟲綱、兩側(cè)對稱的真后生動物。渦蟲體內(nèi)因具有一種干細(xì)胞群（neoblasts）而表現(xiàn)出非常強的再生能力，它對蟲體內(nèi)受到損傷的組織和器官具有替代或修復(fù)作用，即neoblasts可以分化成相應(yīng)的器官或組織。渦蟲作為一種經(jīng)典的模式生物用來研究干細(xì)胞分子機理和機體再生。
　　Wnt信號通路對渦蟲再生的前后軸極性的建立起重要作用，其中通路中的β-catenin蛋白是建立前后軸的關(guān)鍵分子。Wnt信號通路參與動物發(fā)育中的胚胎分

2、化，還與干細(xì)胞的自我更新和增殖密切相關(guān)。
　　MiRNA是一種非編碼小RNA分子，長度大概為20nt，通過和其靶基因的互補結(jié)合來調(diào)控基因表達(dá)，參與多種生理過程，如疾病形成、再生等。miRNA中目前研究最多的一個家族是Let-7，它能參與調(diào)控細(xì)胞分化、凋亡和腫瘤發(fā)生等多種生物學(xué)過程。
　　為了研究let-7對wnt信號通路的調(diào)控，本實驗首先對let-7的功能進(jìn)行研究。過表達(dá)let-7后發(fā)現(xiàn)渦蟲再生時發(fā)生表型缺陷，這說明let-

3、7參與了渦蟲的再生；隨后使用原位雜交實驗發(fā)現(xiàn)let-7幾乎分布在渦蟲全身，和副胚層干細(xì)胞的分布基本吻合，即從空間上研究了let-7與渦蟲再生及干細(xì)胞特性的關(guān)系。頭部marker基因的原位雜交和免疫組化實驗進(jìn)一步驗證了RNA干擾出現(xiàn)了雙頭，并說明了出現(xiàn)雙頭的機制。因此我們對參與渦蟲再生的let-7通過軟件預(yù)測其靶基因，并在mRNA水平上利用熒光定量PCR和構(gòu)建熒光蛋白表達(dá)載體的方法驗證了靶基因預(yù)測結(jié)果的正確性；蛋白水平的western b