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1、為了了解Wnt信號(hào)通路對(duì)急性心肌后梗死區(qū)愈合過程的可能調(diào)控機(jī)制,本研究從整體動(dòng)物及細(xì)胞兩個(gè)水平深入探討了該信號(hào)通路與心肌梗死愈合的關(guān)系。本文研究在建立大鼠急性心肌梗死模型基礎(chǔ)上,用免疫組化和原位雜交方法檢測(cè)大鼠急性心梗后心肌組織Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中兩個(gè)關(guān)鍵的信號(hào)分子β-連環(huán)蛋白(β-catenin)和Dishevelled-1(Dvl-1)的表達(dá)變化,為Wnt通路在心梗愈合過程中的調(diào)控作用尋找直接證據(jù)。為了進(jìn)一步闡明Wnt信號(hào)通路調(diào)控成
2、纖維細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞在該病理生理過程中所表現(xiàn)的細(xì)胞生物學(xué)行為的分子機(jī)制,以大鼠成纖維細(xì)胞系Rat-1為材料,通過構(gòu)建Wnt-1組成員Wnt-3a的真核表達(dá)載體并進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,構(gòu)建了Wnt信號(hào)通路持續(xù)激活的細(xì)胞模型,并在體外成功模擬了纖維母細(xì)胞中Wnt信號(hào)通路持續(xù)激活的狀態(tài),為研究該信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞行為的調(diào)控作用提供了良好的體外模型。在Wnt信號(hào)通路持續(xù)激活細(xì)胞模型成功構(gòu)建的基礎(chǔ)上,本研究初步探討了Wnt信號(hào)通路對(duì)成纖維細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)
3、行為的調(diào)控作用并用RT-PCR方法對(duì)相關(guān)基因的表達(dá)變化進(jìn)行了檢測(cè)。為初步闡明Wnt經(jīng)典信號(hào)通路對(duì)血管新生的調(diào)控及其分子基礎(chǔ),本研究還利用含Wnt-3a分泌性蛋白的大鼠成纖維細(xì)胞系Rat-1的上清液作為條件培養(yǎng)液,以體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系ECV304,在體外血管新生檢測(cè)體系(Invitroangiogenesisassaykit)中研究Wnt信號(hào)通路激活對(duì)ECV304血管生成能力的影響;并用RT-PCR方法對(duì)VEGF基因的表達(dá)變化進(jìn)行
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