P38信號通路在心梗后大鼠心肌鉀通道重構的氧化還原調控機制.pdf

1、目的：p38激酶是細胞凋亡的關鍵調節(jié)因子，尤其在因為病理性應激所導致的心肌肥厚及壞死中，但是它對病理狀態(tài)下心肌離子通道尤其是電壓門控鉀通道(Kv)的調控機制還并不清楚。所以本研究目的是進一步明確大鼠心梗(MI)6-8周后p38信號通路在電壓門控鉀通道(Kv)調控中的作用機理。
　　方法：從河北醫(yī)科大學實驗動物中心購得雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠。稱得體重在180～200g的雄性Sprague-Dawley(SD)大

2、鼠按照文獻方法建立MI模型，在手術后6-8周，對大鼠進行麻醉，開胸分離出心臟,并使用Langendoff法通過冠狀動脈進行膠原酶灌流，獲得單一分離的心室肌細胞，在CO2培養(yǎng)箱中孵育4.5小時后,應用細胞膜片鉗試驗對樣本電壓門控鉀通道(Kv)及Ito進行分析。本實驗使用非放射性p38激酶檢測試劑盒檢測(細胞信號技術) p38激酶活性。
　　結果：
　　1、使用免疫印跡法檢測顯示MI后心肌p38激酶活性明顯增強，與對照組相比增加

3、大約2-6倍(Control組：2.0±1.1，n=6；MI組：7.2±1.7， n=6；P<0.05)。
　　2、把實驗組分離提取的組織標本經過與p38激酶阻斷劑SB20358015 M混合后4-5個小時，應用電生理技術檢測Ito電流強度，可見其明顯增高(SB203580+MI：25.6±1.0 pA/pF，n=10；MI組：15.9±2.1 pA/pF， n=10；P<0.05)。
　　3、硫氧還蛋白(Trx)還原酶阻斷

4、劑金諾芬(AF)試劑明顯阻斷了SB203580對MI老鼠心肌Ito電流的明顯的增強效果(MI+AF+SB203580：0.5±0.1，n=10)，而AF對對照組Ito無明顯影響， Trx能夠顯著增加Ito電流的強度,另外胰島素樣生長因子能夠增加Trx的作用，能夠增強Ito電流的強度。
　　4、免疫蛋白印記法顯示經過p38阻滯劑SB203580溶解混合后的MI心肌細胞的Kv4.2通道蛋白表達量顯著增加，即使并沒有恢復到未處理組的水平

5、，但是這與既往在MI心肌相關的研究中所了解到的Ito電流密度的改變是一致的。經過p38激酶阻斷劑SB203580處理過的對照組的相關心肌的Kv4.2通道蛋白表達含量沒有表現出明顯增多的跡象，而基本上保持平衡。
　　結論：缺血壞死導致心梗的心肌鉀通道改變是能夠調節(jié)的，能夠通過激活p38信號通路促進鉀通道的改變導致Ito改變。這一過程可被Trx、IGF-1調控。本研究結果表明，在MI心肌中，p38激酶活性明顯增強，進一步降低Kv通道介