P38信號(hào)通路在心梗后大鼠心肌鉀通道重構(gòu)的氧化還原調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的：p38激酶是細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，尤其在因?yàn)椴±硇詰?yīng)激所導(dǎo)致的心肌肥厚及壞死中，但是它對(duì)病理狀態(tài)下心肌離子通道尤其是電壓門控鉀通道(Kv)的調(diào)控機(jī)制還并不清楚。所以本研究目的是進(jìn)一步明確大鼠心梗(MI)6-8周后p38信號(hào)通路在電壓門控鉀通道(Kv)調(diào)控中的作用機(jī)理。
　　方法：從河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)得雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠。稱得體重在180～200g的雄性Sprague-Dawley(SD)大

2、鼠按照文獻(xiàn)方法建立MI模型，在手術(shù)后6-8周，對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉，開胸分離出心臟,并使用Langendoff法通過冠狀動(dòng)脈進(jìn)行膠原酶灌流，獲得單一分離的心室肌細(xì)胞，在CO2培養(yǎng)箱中孵育4.5小時(shí)后,應(yīng)用細(xì)胞膜片鉗試驗(yàn)對(duì)樣本電壓門控鉀通道(Kv)及Ito進(jìn)行分析。本實(shí)驗(yàn)使用非放射性p38激酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)(細(xì)胞信號(hào)技術(shù)) p38激酶活性。
　　結(jié)果：
　　1、使用免疫印跡法檢測(cè)顯示MI后心肌p38激酶活性明顯增強(qiáng)，與對(duì)照組相比增加

3、大約2-6倍(Control組：2.0±1.1，n=6；MI組：7.2±1.7， n=6；P<0.05)。
　　2、把實(shí)驗(yàn)組分離提取的組織標(biāo)本經(jīng)過與p38激酶阻斷劑SB20358015 M混合后4-5個(gè)小時(shí)，應(yīng)用電生理技術(shù)檢測(cè)Ito電流強(qiáng)度，可見其明顯增高(SB203580+MI：25.6±1.0 pA/pF，n=10；MI組：15.9±2.1 pA/pF， n=10；P<0.05)。
　　3、硫氧還蛋白(Trx)還原酶阻斷

4、劑金諾芬(AF)試劑明顯阻斷了SB203580對(duì)MI老鼠心肌Ito電流的明顯的增強(qiáng)效果(MI+AF+SB203580：0.5±0.1，n=10)，而AF對(duì)對(duì)照組Ito無明顯影響， Trx能夠顯著增加Ito電流的強(qiáng)度,另外胰島素樣生長(zhǎng)因子能夠增加Trx的作用，能夠增強(qiáng)Ito電流的強(qiáng)度。
　　4、免疫蛋白印記法顯示經(jīng)過p38阻滯劑SB203580溶解混合后的MI心肌細(xì)胞的Kv4.2通道蛋白表達(dá)量顯著增加，即使并沒有恢復(fù)到未處理組的水平

5、，但是這與既往在MI心肌相關(guān)的研究中所了解到的Ito電流密度的改變是一致的。經(jīng)過p38激酶阻斷劑SB203580處理過的對(duì)照組的相關(guān)心肌的Kv4.2通道蛋白表達(dá)含量沒有表現(xiàn)出明顯增多的跡象，而基本上保持平衡。
　　結(jié)論：缺血壞死導(dǎo)致心梗的心肌鉀通道改變是能夠調(diào)節(jié)的，能夠通過激活p38信號(hào)通路促進(jìn)鉀通道的改變導(dǎo)致Ito改變。這一過程可被Trx、IGF-1調(diào)控。本研究結(jié)果表明，在MI心肌中，p38激酶活性明顯增強(qiáng)，進(jìn)一步降低Kv通道介